[发明专利]具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质

说明书

技术领域

本发明涉及一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，属于生物化工领域中的蛋白层析分离技术。

背景技术

抗体根据制备方法的不同可以分为：以纯化的抗原免疫动物获得的血清多克隆抗体；通过杂交瘤细胞技术制备的单克隆抗体；通过基因工程手段研制的基因工程抗体，无论采用何种制备方法都要对获得的抗体进行分离纯化。目前根据抗体来源、用途以及抗体本身的特性的不同，在能达到最终要求的情况下，使用尽可能少的纯化步骤，提高收率，可以有效的提高纯化效率。在具体应用中采用不同的分离方法相结合的方式以获得符合要求的抗体。一般将抗体分离纯化过程分为三个步骤：样品的粗提；粗提物精制；抗体纯化。其中样品的粗提主要包括除细胞碎片、除核酸以及应用盐析法获得较高纯度的抗体粗提物；粗提物精制主要包括除盐及小分子物质；抗体的纯化主要包括应用不同的色谱方法及其组合方法对抗体进行进一步的纯化。其中亲和层析利用目标抗体和特异性功能基团可逆的结合，实现生物活性物质的高效分离纯化，是最常用的抗体纯化手段，但亲和配基多为大分子蛋白类物质，其存在成本高，易失活以及结合稳定性差等缺点，新型的亲和配基及新的吸附原理进年来得到广泛研究。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本案提供一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质。

为实现上述目的，本案通过以下技术方案实现：

一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其中，包括层析基质和配基，所述的层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球，所述的配基为组氨酸的羧基和2-氨基苯并噻唑的氨基反应后形成的双功能配基。

优选的是，所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其中，所述的层析基质为具有多孔结构和表面羟基的亲水性微球。

优选的是，所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其中，所述层析基质为PGMA—EDMA微球。

一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质的制备方法，其中，包括如下步骤：

1)将层析基质抽干后，加入0.1-0.5倍层析基质质量的20％v/v二甲基亚砜、0.1-1倍层析基质质量的溴化氰和0.3-0.7倍层析基质质量的氢氧化钠，25℃下150rpm摇床中活化30-50小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；

2)将活化层析基质和0.1-0.5倍层析基质质量的N-溴代丁二酰亚胺混合进行溴代醇化，25℃下150rpm摇床中反应1-5小时，抽滤，用去离子水洗涤得到溴代醇化的层析基质；

3)将溴代醇化的层析基质和0.4-0.6倍层析基质质量的组氨酸以及0.5-1M碳酸钠缓冲液混合，碳酸钠缓冲液的pH为10-12，25℃下150rpm摇床中反应4-8小时，得到组氨酸偶联的介质；

4)取组氨酸偶联的介质，分别用体积百分比为20％、50％和80％的丙酮溶液清洗，再用乙酸乙酯清洗，加入0.4-0.8倍层析基质质量的乙酸乙酯、N-羟乙基酞酰亚胺和1,3-二环己基碳二亚胺，N-羟乙基酞酰亚胺浓度为0.1-0.5g/ml，1,3-二环己基碳二亚胺浓度为0.3-0.8g/ml，25℃振荡10-20小时，得到N-羟乙基酞酰亚胺活化的介质；

5)取N-羟乙基酞酰亚胺活化的介质，依次用体积百分比为50％和80％的丁酮溶液清洗，去离子水洗涤，加入0.2-1.5倍层析基质质量的20mg/ml 2-氨基苯并噻唑溶液，25℃下200rpm水浴摇床中反应24-36小时；最后将介质抽滤，去离子水洗涤，加入到含有2-6倍层析基质质量的乙二胺和三乙胺中，25℃下150rpm摇床中反应4-10小时，去离子水洗涤，得到具有组氨酸和2-氨基苯并噻唑双功能配基的疏水性电荷诱导层析介质，其配基密度为60-100μmol/ml。

优选的是，所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质的制备方法，其中，所述的乙二胺和三乙胺的体积比为1:1。

本发明的有益效果是：