[发明专利]15种呼吸道感染病原体联检的引物探针组合及试剂盒

说明书

本发明涉及病原体检测试剂，具体公开了15种呼吸道感染病原体联检的引物探针组合及试剂盒。本发明针对肺炎克雷伯菌，流感嗜血杆菌，化脓链球菌，金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌，肺炎衣原体，结核分枝杆菌，嗜麦芽窄食单胞菌，鲍曼不动杆菌，肺炎支原体，粪肠球菌，嗜肺军团杆菌，肺炎链球菌，绿脓假单胞菌和脓肿分枝杆菌的基因序列保守区域特异的靶序列，通过设计互相不存在交叉反应的引物和探针，既克服了针对不同病原菌的检测探针易产生相互影响或干扰的问题，又保证了不同引物和探针的组合和匹配，还可实现在相同温度下同时进行高效的特异性检测。

技术领域

本发明涉及病原体检测试剂，具体地说，涉及15种呼吸道感染病原体联检的引物探针组合及试剂盒。

背景技术

在成年人和儿童中，发热伴呼吸道症候群是最普通的急性传染病，主要由多种病原体引起呼吸道局部感染或呼吸道以外组织器官病变，其中包括细菌、病毒、支原体、衣原体等。

由于临床症状均表现为发热(体温≥38℃)，并伴有乏力、头痛、咳嗽、咽喉疼痛、全身酸痛等上呼吸道症状，对各种病原体的诊断需要大量的实验筛查，操作步骤繁琐、耗费时间较长，工作效率较低。

目前，常见的社区性呼吸道感染病原体包括肺炎克雷伯菌，流感嗜血杆菌，化脓链球菌，金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌，肺炎衣原体，结核分枝杆菌，嗜麦芽窄食单胞菌，鲍曼不动杆菌，肺炎支原体，粪肠球菌，嗜肺军团杆菌，肺炎链球菌，绿脓假单胞菌，脓肿分枝杆菌。

为提高临床检测效率，快速确认病原体，为后续的用药和治疗进行指导，急需更简便、更快速并且能够联合检测的方案。在检测中，PCR法由于其快速简便的特点逐渐呈现出要替代以细菌培养和血清学检测为主的传统检测方法的趋势。而对于PCR方法来说，引物的特异性是其检测的特异性和敏感性的基础。

然而，目前还没有可对以上15种病原菌进行同时PCR法检测，并保证检测准确性和特异性的有效方法。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种15种呼吸道感染病原体联检的引物探针组合及试剂盒。

为了实现本发明的目的，本发明的技术方案如下：

本发明针对肺炎克雷伯菌，流感嗜血杆菌，化脓链球菌，金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌，肺炎衣原体，结核分枝杆菌，嗜麦芽窄食单胞菌，鲍曼不动杆菌，肺炎支原体，粪肠球菌，嗜肺军团杆菌，肺炎链球菌，绿脓假单胞菌和脓肿分枝杆菌的基因序列保守区域特异的靶序列设计引物和Taqman探针，之后经过严格筛选，获得一套互相不存在交叉反应的引物探针组合，可利用Real-time PCR的方法，快速联合检测样品中是否存在以上15种病原体的核酸。

所述引物探针组合包括如下引物和探针：

(1)肺炎克雷伯菌

P1：5’-TGCCCACTTTGTTAACGCCT-3’；

P2：5’-AGATAAAACGCCAGGCCAAGA-3’；

探针1：5’-X1-CGGCGTGGGATTCGCTTTCGAGCCT-Y-3’；

(2)流感嗜血杆菌

P3：5’-CTGACCAGGTGCGTGATAGG-3’；

P4：5’-CTGACCAGGTGCGTGATAGG-3’；

探针2：5’-X2-TGCCCACCACGATCCGATTCCAC-Y-3’；

(3)化脓链球菌

P5：5’-CTAGGAGCACGGATTCCAGC-3’；

P6：5’-CTAGGAGCACGGATTCCAGC-3’；