[发明专利]桑花叶型萎缩病相关病毒检测引物和质粒及检测方法

权利要求书

1.一种桑花叶型萎缩病相关病毒检测用引物，其特征在于，分别为引物MCP746f和MCP1148r，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述桑花叶型萎缩病相关病毒检测用引物在桑花叶型萎缩病相关病毒分子检测中的应用或在制备桑花叶型萎缩病相关病毒分子检测产品方面的应用。

3.一种桑花叶型萎缩病相关病毒检测用试剂盒，其特征在于，包含有权利要求1所述桑花叶型萎缩病相关病毒特异性检测引物。

4.一种桑花叶型萎缩病相关病毒检测用阳性对照质粒，其特征在于，为质粒13MCP-pEASY-Bblunt，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

5.权利要求4所述桑花叶型萎缩病相关病毒检测用阳性对照质粒在桑花叶型萎缩病相关病毒分子检测中的应用或在制备桑花叶型萎缩病相关病毒分子检测产品方面的应用。

6.一种权利要求4所述阳性对照质粒的构建用引物，其特征在于，分别为引物13MCP156f和13MCP1464r，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

7.权利要求6所述引物在桑花叶型萎缩病相关病毒分子检测中的应用或在制备桑花叶型萎缩病相关病毒分子检测产品方面的应用。

8.一种桑花叶型萎缩病相关病毒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.提取待测样品的DNA；

S2.以步骤S1提取的DNA为模板，利用权利要求1所述的引物，进行PCR扩增反应；

S3.步骤S2反应结束后，凝胶电泳检测扩增产物，以权利要求4所述阳性对照质粒作为对照，根据琼脂糖凝胶上是否出现特异性的403bp的DNA片段产物，判断样品中是否存在有桑花叶型萎缩病相关病毒。

9.根据权利要求8所述桑花叶型萎缩病相关病毒的检测方法，其特征在于，步骤S2所述PCR扩增反应的反应体系为：

其中，2×反应缓冲液的组分为Taq DNA聚合酶，160mM Tris-HCl，40mM(NH4)2SO4，3.0mMMgCl2，400μM dNTP。

10.根据权利要求8所述桑花叶型萎缩病相关病毒的检测方法，其特征在于，步骤S2所述PCR扩增反应的程序为：94℃ 5min；94℃ 30s，62℃ 30s，72℃ 30s，35个循环；72℃10min。