[发明专利]一种基于肽段C末端选择性酶标记的质谱从头测序方法

权利要求书

1.一种基于肽段C末端选择性酶标记的质谱从头测序方法，其特征在于：在有机相中，肽段C末端的羧基在肽段C末端酰胺酶的催化作用下，直接通过酰胺化反应标记上带碱性基团的小分子；所述带碱性基团的小分子为：肼、乙二胺、丁二胺、戊二胺、环己二胺、三(2-氨基乙基)胺中的一种或两种以上；或，

先通过酰胺化反应标记上带氨基的不饱和烃类，后通过叠氮-炔基或者巯基-烯的点击化学反应连接上碱性功能分子；肽段C末端标记上的碱性分子增加二级质谱中y离子的数目，提高肽段在质谱中的响应和碎裂效率，从而实现肽段测序；能够特异性催化肽段C末端的羧基发生酰胺化反应，而对肽段侧链的羧基无催化作用；所述带氨基的不饱和烃类为丙烯胺、丙炔胺、2-丁烯胺、3-丁炔胺中的一种或两种以上；所述碱性功能分子为巯基乙胺、巯基丙胺、3-巯基-1,2,4-三氮唑、N,N-二甲基叠氮乙基胺、3-叠氮基丙胺中的一种或两种以上。

2.如权利要求1所述的基于肽段C末端选择性酶标记的质谱从头测序方法，其特征在于：所述有机相是乙腈、丙酮、异丙醇、乙腈中加入0-5%的二甲亚砜、乙腈中加入0-5%的N,N-二甲基甲酰胺、丙酮中加入0-5%的二甲亚砜、丙酮中加入0-5%的N,N-二甲基甲酰胺、异丙醇中加入0-5%的二甲亚砜、异丙醇中加入0-5%的N,N-二甲基甲酰胺中的一种或两种以上。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述肽段为：单一肽段或者是蛋白质酶解后多肽的混合物；所述肽段与带碱性基团的小分子的质量体积比为：0.005-1克每毫升。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述肽段与带碱性基团的小分子的质量体积比为：0.005-1克每毫升；所述酰胺化反应的温度为25-50℃，反应时间为12-72h。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述肽段与带氨基的不饱和烃类的质量体积比为：0.005-1克每毫升；

所述酰胺化反应的温度为25-50℃，反应时间为12-72h。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述肽段测序是利用二级质谱中鉴定到的肽段的b离子和C末端碱性基团标记后增加的y离子，根据碎片离子之间的质量差异判断氨基酸种类，实现肽段从头测序分析。

7.如权利要求1-6任一所述的基于肽段C末端选择性酶标记的质谱从头测序方法，其特征在于：应用于肽段、蛋白质酶解产生的多肽的测序。