[发明专利]一种改进的重金属铜人工抗原的合成方法及NOTA在制备重金属铜人工抗原试剂中的用途

权利要求书

1.一种改进的重金属铜人工抗原的合成方法，其特征在于，以2-S-(4-氨基苯)-1,4,7三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸为螯合剂，将铜离子与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联，偶联方法如下：

称取6mg 2-S-(4-氨基苯)-1,4,7三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸，溶解于2ml的0.01mol/L、pH7.4的4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液，制备成螯合剂溶液，此反应液为A液；

称取70.33mg硝酸铜溶解于5ml超纯水中，制备成7.5× 10^-2M的硝酸铜溶液，此反应液为B液；

吸取185μl的B液逐滴加入到A液中，室温下避光反应3h，此反应液为C液；

向C液中逐滴加入650μl，20mM的戊二醛溶液，室温避光反应过夜，此反应液为D液；

称取20mg牛血清白蛋白BSA溶解于3ml的4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液，室温下磁力搅拌混匀，此反应液为E液；

将D液逐滴加入到E液中，室温下避光反应24h，后逐滴加入200μl硼氢化钠溶液，室温下避光反应1h；所述硼氢化钠溶液的制备方法为取20mg硼氢化钠溶解于200μl超纯水中；

反应液先用8KD的透析袋透析3次，再用30KD的超滤离心管7500rpm离心4次，用8ml的0.01mol/L、pH7.4的4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液复溶，后分装，-20℃低温保存。

2.2-S-(4-氨基苯)-1,4,7三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸在制备重金属铜人工抗原试剂中的用途，其特征在于，以2-S-(4-氨基苯)-1,4,7三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸为螯合剂，将铜离子与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联，偶联方法如下：

称取6mg 2-S-(4-氨基苯)-1,4,7三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸，溶解于2ml的0.01mol/L、pH7.4的4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液，制备成螯合剂溶液，此反应液为A液；

称取70.33mg硝酸铜溶解于5ml超纯水中，制备成7.5× 10^-2M的硝酸铜溶液，此反应液为B液；

吸取185μl的B液逐滴加入到A液中，室温下避光反应3h，此反应液为C液；

向C液中逐滴加入650μl，20mM的戊二醛溶液，室温避光反应过夜，此反应液为D液；

称取20mg牛血清白蛋白BSA溶解于3ml的4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液，室温下磁力搅拌混匀，此反应液为E液；

将D液逐滴加入到E液中，室温下避光反应24h，后逐滴加入200μl硼氢化钠溶液，室温下避光反应1h，所述硼氢化钠溶液的制备方法为取20mg硼氢化钠溶解于200μl超纯水中；

反应液先用8KD的透析袋透析3次，再用30KD的超滤离心管7500rpm离心4次，用8ml的0.01mol/L、pH7.4的4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液复溶，后分装，-20℃低温保存。