[发明专利]一种同时表达靶向CD19和CD20的CAR与PD1-CD28嵌合受体的慢病毒载体

说明书

本发明涉及分子生物学领域，具公开了一种同时表达靶向CD19和CD20的CAR与PD1‑CD28嵌合受体的慢病毒载体。所述慢病毒载体通过同时高效表达靶向CD19和CD20的CAR和PD1‑CD28嵌合体，使该载体感染的T细胞不仅可以靶向识别表达CD19和CD20的肿瘤细胞，而且可以解除PD‑L1/PD1介导的免疫抑制，从而发挥更强地杀伤肿瘤细胞的能力。进一步地，本发明优化了载体中关键元件的选择和连接顺序，提高靶向CD19和CD20的CAR和PD1‑CD28嵌合体在人类T细胞中的表达效率。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地说，涉及一种同时表达靶向CD19和CD20的CAR与PD1-CD28嵌合受体的慢病毒载体。

背景技术

近年来，抗CD19的CAR-T在治疗复发，耐药，难治B细胞白血病和淋巴瘤方面取得了举世瞩目的成就，引起世界各国肿瘤临床医生的极大兴趣。但是仅靶向CD19的CAR-T治疗B细胞来源肿瘤会导致肿瘤细胞CD19低表达或不表达，从而导致肿瘤细胞免疫逃逸而产生复发和耐药。因此同时靶向CD19和CD20的CAR可以同时靶向B细胞来源肿瘤的CD19和CD20两个靶点，因此对于B细胞来源肿瘤尤其是CD19CAR-T治疗失败的患者，双靶点CAR-T会取得较好的治疗效果。CD19和CD20是B细胞系的细胞，包括正常的B细胞，前B细胞，B细胞淋巴瘤和白血病细胞，特异性表达的两个膜蛋白,其他细胞和组织都不表达CD19和CD20。研究表明，阻断PD-L1/PD1介导的免疫抑制将会是CAR-T成功用于治疗恶性肿瘤的关键。

阻断PD-L1和PD1的结合，理论上就可以消除PD1信号对T细胞的抑制，激活T细胞的免疫反应，起到抗肿瘤的效果。目前，FDA批准了两个抗PD1的单抗Nivolumab和Pembrolizumab用于治疗其他疗法已失败的转移性非小细胞肺癌和黑色素瘤。虽然我国黑色素瘤的发病率并不高，但肺癌是我国第一大癌，同时也是死亡率最高的癌症。其中的非小细胞肺癌，生存率极低。5年生存率不容乐观。目前，国家食品药品监督总局(CFDA)尚未批准Nivolumab和Pembrolizumab在国内临床使用。而且Nivolumab和Pembrolizumab需要多次使用，对大多数患者来说，医疗负担过重。

针对PD-L1的单抗也能起到类似的抗肿瘤效果。根据目前已经报道的临床研究，MPDL3280A(anti-PD-L1人源单抗)在治疗黑色素瘤，非小细胞肺癌，直结肠癌(colorectalcancer)和膀胱癌(bladder cancer)都取得了不同程度的疗效。MEDI4736是另外一个人源抗PD-L1单克隆抗体，它能阻断PD-L1和PD1的结合，使得T细胞能够识别和杀死肿瘤细胞。对于MEDI4736的临床抗肿瘤效果正在多个中心展开，其中也包括非小细胞性肺癌和头颈部肿瘤。

鉴于抗PD-L1/PD1抗体免疫治疗在我国的应用问题，急需提供一种可替代的治疗产品及方法。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种同时表达靶向CD19和CD20的CAR与PD1-CD28嵌合受体的慢病毒载体及其构建方法与应用。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

第一方面，本发明提供一种同时表达靶向CD19和CD20的CAR与PD1-CD28嵌合受体的慢病毒载体。