[发明专利]一种甲基营养型芽孢杆菌B18及其液体制剂的制备和应用

权利要求书

1.一种甲基营养型芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus）B18，其特征在于，该菌株已进行保藏，保藏单位：中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.14641。

2.一种以权利要求1所述甲基营养型芽孢杆菌B18为活性成分的液体制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）一级斜面种子：制作牛肉膏蛋白胨斜面培养基，接种甲基营养型芽孢杆菌B18后，培养制成一级斜面种子；

2）二级液体种子：营养肉质培养液经高压灭菌后，在通氧控制下盛于三角瓶，在无菌状态接种一级斜面种子，振荡培养，制成二级液体种子；

3）液体发酵：营养肉质培养液经高压灭菌后，在通氧控制下盛于三角瓶，在无菌状态接种二级液体种子，接种量为液体总体积的10%，振荡培养，制成以甲基营养型芽孢杆菌B18为活性成分的液体制剂，然后保存；

所述的牛肉膏蛋白胨斜面培养基的成分为：牛肉膏7 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂18g，水1000 mL；

所述的营养肉质培养液的成分为：牛肉膏7 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，黄柏嫩枝浸渍液1000 mL。

3.权利要求2所述制备方法制备得到的以甲基营养型芽孢杆菌B18为活性成分的液体制剂。

4.根据权利要求3所述的液体制剂，其特征在于，所述的液体制剂含活芽孢数不低于1×10⁹cfu/g。

5.权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌B18在防治由病原菌Nectria haematococca引起的黄柏烂皮病中的应用。

6.权利要求3所述的液体制剂在防治由病原菌Nectria haematococca引起的黄柏烂皮病中的应用，其特征在于，将病斑刮除干净，用无菌棉球蘸取液体制剂稀释液对发病部位进行涂抹，间隔7 d一次，共5次。