[发明专利]一种提高尿促性素效价的方法

说明书

本发明公开了一种利用层析技术纯化尿促性素的方法。具体的说，就是运用亲和层析和离子交换层析纯化低效价尿促性素，将效价约为30iu/mg的尿促性素效价提高到约600iu/mg,并且各项指标均符合中国药典规定。本发明方法操作简单，生产成本低，产品纯度高，更能满足临床和科研的需求。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及一种应用层析法来制备效价高、收率稳定的尿促性素的方法。

背景技术

尿促性素（HMG）是由人脑下垂体前叶部分分泌的一种糖蛋白促性腺激素，一般是从绝经期或绝经期后妇女的尿液中经提取纯化而制得。HMG 含有卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH），其所含比例近似1 ：1。临床主要用于治疗妇女因功能性不排卵所致的不育症；男性因激素水平低下所引起的精子过少或活力不足。另外，还用于治疗诸如妇女闭经、月经不调、男女之性机能失调等症。

1928 年Ascbheim 首先报道了从更年期妇女尿液中发现了活性物质，之后报道虽不少，但真正对HMG 的了解和制备，是从20 世纪60 年代的Donimi 开始，并逐渐形成比较规范化的工艺来制备的。我国从20 世纪70 年代开始研究，80 年代正式进入临床试验阶段，90年代开始大量生产。

目前，比较经典的制备工艺是高岭土- 乙醇法制备HMG 粗制品，再用各种纯化方法进行纯化。国内目前常用的纯化方法收率偏低（一般小于50%），成品效价在100iu/mg 左右。中国专利CN101792482A 介绍了“一种促性腺激素的纯化方法”，该方法采用硅酸铝粉末作为吸附剂提取纯化HMG，但其效价仅能达到150iu/mg。

在实际生产中，选用层析法纯化尿促性素,可以更有效的去除其中的多种杂蛋白，并且使其理化性质和生物活性保持稳定，从而使产品的各项指标均符合中国药典标准。更重要的是，通过工艺的不断改进和完善，使得尿促性素效价不低于600iu/mg，带来巨大的经济效益和社会效益。

发明内容

本发明提供了一种层析纯化尿促性素的方法，使尿促性素效价可稳定达到600iu/mg 以上。

本发明的技术方案是：低效价尿促性素经产品溶解、亲和层析、离子交换层析后得到高效价尿促性素，包括如下步骤：

（1）尿促性素粗品用含pH 6.0~8.0的含0.1~0.3mol/L NaCl、0.01~0.03 mol/L EDTA的Tris-HCl缓冲液溶解，离心去沉淀，得上清液；

（2）亲和层析：用pH 6.0~8.0含0.1~0.3mol/L NaCl Tris-HCl缓冲液平衡Argmatin-Sepharose柱，上清液上柱后， 用pH 6.0~8.0含0.1~0.3mol/L NaCl、0.1~0.3mol/L盐酸胍的Tris-HCl缓冲液洗脱，洗脱液经超滤脱盐至无氯离子，加NaCl和1mol/L Tris-HCl稀释至pH 7.0~9.0含0.05~0.30mol/L NaCl的Tris-HCl缓冲液；

（3）离子交换层析：将上述缓冲液上样于DEAE-Sepharose Fast Flow柱，用pH 6.0~8.0含0.01~0.20mol/L NaCl 的Tris-HCl平衡液冲洗，换用pH 6.0~8.0含0.1~0.3mol/L NaCl的Tris-HCl缓冲液洗脱。

（4）紫外检测，收集酶活性部分，超滤浓缩后冷冻干燥，即得成品；

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。

实施例1

（1）预处理：取尿促性素粗品按重量1:15（w/v）比例加入pH 7.0的含0.2mol/L NaCl、0.02mol/L EDTA 的Tris-HCl缓冲液溶解，离心去沉淀，得上清液；