[发明专利]一种提高米尔贝霉素发酵产物中米尔贝霉素A3含量的方法

权利要求书

1.一种提高米尔贝霉素发酵产物中米尔贝霉素A3含量的方法，其特征在于，发酵到48h时，每天在发酵液中补入一定量的乙酸盐，直至发酵结束；每天向发酵液中补入的乙酸盐的量为0.01-0.1％；

当发酵液中总糖浓度降低到2.0％以下时，开始补加蔗糖溶液，维持发酵液中总糖的浓度在1.5-2.5％之间；

所用发酵菌种为吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙酸盐包括乙酸钠、乙酸钾、乙酸铵、乙酸锌中的一种或几种。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述乙酸盐以溶液的形式添加。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所用乙酸盐溶液的浓度为0.5％-20％。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所用乙酸盐溶液为浓度5％的乙酸钠溶液。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，每天向发酵液中补入的乙酸盐的量为0.05％。

7.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，向发酵液中补入乙酸盐的方式为每天一次间歇补入或用连续流加的方式补入。

8.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，当发酵到120-150h后，检测发酵液中总糖浓度，当发酵液中总糖浓度降低到2.0％以下时，开始补加蔗糖溶液，维持发酵液中总糖的浓度在1.5-2.5％之间。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，结束发酵前12h停止补加蔗糖。

10.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，发酵条件包括：温度27-29℃，搅拌转速100-600rpm，通气量0.4-1.2vvm，控制发酵罐上溶氧值(DO)≥30％；和/或，发酵240-288h后结束发酵。

11.根据权利要求1所述方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)斜面菌种培养

将吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)菌种接种于斜面培养基，在温度27-29℃，湿度20-60％条件下培养10-12天，得到成熟的斜面菌种；

所用斜面培养基配方为：蔗糖0.4％，脱脂奶粉0.1％，酵母粉0.2％，蛋白胨0.1％，琼脂2.0％；

2)液体种子培养

从成熟的斜面菌种刮取适量孢子接种于液体种子培养基中，在温度27-29℃，搅拌转速100-500rpm条件下通气培养40-48小时，得到成熟的种子液；或者，进一步将成熟的种子液按相同的方法再进行一次扩大培养；

所用液体种子培养基配方为：蔗糖2％，脱脂奶粉0.1％，黄豆饼粉0.5％，蛋白胨0.5％，碳酸钙0.1％；

3)液体发酵培养

将成熟的种子液按照4-12％的接种量接种至发酵培养基中，在温度27-29℃，搅拌转速100-600rpm条件下通气发酵培养，通气量0.4-1.2vvm，控制发酵罐上溶氧值≥30％；

所用液体发酵培养基配方为：蔗糖8％，脱脂奶粉1.0％，黄豆饼粉1.0％，蛋白胨1.0％，磷酸氢二钾0.5％，硫酸亚铁0.1％，硫酸锌0.01％，硫酸铜0.05％，钼酸钠0.05％，碳酸钙0.5％；

4)发酵到48h时，每天在发酵液中补入浓度为5％的乙酸钠溶液，每天补入乙酸钠的量在发酵液中的质量分数为0.05％，直至发酵结束；

补入乙酸钠溶液的方式为每天一次间歇补入或用连续流加的方式；

5)发酵到120-150h后，取样检测发酵液中总糖浓度，当总糖浓度降低到2.0％以下时，开始补蔗糖溶液，维持发酵液中总糖的浓度在1.5-2.5％之间，放罐前12h停止补糖，发酵240-288h后结束发酵，即可。

12.权利要求1-11任一项所述方法所制得的发酵产物。