[发明专利]一种低成本合成ARK-Cu的方法

说明书

本发明公开了一种低成本合成ARK‑Cu的方法，采用液相合成法，将Cbz‑Ala‑OH与H‑Arg(NO₂)‑OH连成二肽Cbz‑Ala‑Arg(NO₂)‑OH，再与Lys(Cbz)‑OH反应，生成全保护三肽Cbz‑Ala‑Arg(NO₂)‑Lys(Cbz)‑OH，然后经氢气/钯碳脱保护生成H‑Ala‑Arg‑Lys‑OH，最后在水中与醋酸铜生成ARK‑Cu。本发明合成方法简单，无需柱色谱纯化，用乙酸乙酯重结晶就可得到纯度97％以上的Cbz‑Ala‑Arg(NO₂)‑Lys(Cbz)‑OH，合成低成本，可用于大量合成ARK‑Cu。

技术领域

本发明属于多肽合成技术领域，具体涉及一种铜肽的合成方法。

背景技术

ARK-Cu是一种新型铜肽，是由丙氨酸、精氨酸和赖氨酸组成的三肽与铜形成的络合物，具有深层修复疤痕，修复老损细胞，灭菌以及深层美白等功效。ARK-Cu是基于GHK-Cu的一种改构，用丙氨酸替代甘氨酸，用精氨酸替代组氨酸。现在目前针对这种三肽的合成有固相合成和液相合成两种，固相合成的优点在于快速、方便、产率高、纯度好，缺点在于成本高，以及将肽从固相树脂上切割下来经常用三氟乙酸，因此非常依赖反向色谱纯化以及离子交换。液相合成的优点是成本低，但是合成的纯度较差，每步中间体都需要处理，纯化，周期太长。

发明内容

本发明的目的在于提供一种低成本、大量合成ARK-Cu的方法。

为达到上述目的，本发明所采用的技术方案由下述步骤组成：

1、合成Cbz-Ala-Arg(NO₂)-OH

以N,N'-二甲基甲酰胺为溶剂，将Cbz-Ala-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺、H-Arg(NO₂)-OH、N,N'-二异丙基乙胺在室温条件下反应，反应完后将反应液倒入水中，用柠檬酸调节pH＝3～4，室温搅拌析出固体，过滤，水洗，干燥，得到Cbz-Ala-Arg(NO₂)-OH。

2、合成Cbz-Ala-Arg(NO₂)-Lys(Cbz)-OH

以N,N'-二甲基甲酰胺为溶剂，将Cbz-Ala-Arg(NO₂)-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺、Lys(Cbz)-OH、N,N'-二异丙基乙胺在室温条件下反应，反应完后将反应液倒入水中，用柠檬酸调节pH＝3～4，室温搅拌析出固体，过滤，水洗，干燥，用乙酸乙酯重结晶，得到纯度97％以上的Cbz-Ala-Arg(NO₂)-Lys(Cbz)-OH。

3、合成H-Ala-Arg-Lys-OH

将Cbz-Ala-Arg(NO₂)-Lys(Cbz)-OH溶解于甲醇和水的混合溶剂中，加入钯碳，通氢气脱保护，生成H-Ala-Arg-Lys-OH，即ARK。

4、合成ARK-Cu

将H-Ala-Arg-Lys-OH与醋酸铜在水中络合，经冷冻干燥，得到ARK-Cu。

上述步骤1中，优选Cbz-Ala-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺、H-Arg(NO₂)-OH、N,N'-二异丙基乙胺的摩尔比为1:1.1～1.3:1.3～1.5:1～1.1:1～1.1，室温反应时间优选4～7小时。

上述步骤2中，优选Cbz-Ala-Arg(NO₂)-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺、Lys(Cbz)-OH、N,N'-二异丙基乙胺的摩尔比为1:1.1～1.3:1.3～1.5:1～1.1:1～1.1，室温反应时间优选2～5小时。