[发明专利]一种白蔹种子超低温保存方法

权利要求书

1.本发明的目的是提供一种白蔹种子超低温保存方法，包括步骤以下：

(1)室温下将白蔹种子用70％酒精进行消毒，用white液体培养基浸泡20～60min后，再加入终浓度为1.5～2.5mol/L甘油和1～1.5mol/L二甲基亚砜，继续处理20～60min后，取出处理过的白蔹种子；

(2)处理过的白蔹种子放入冻存管中，再加入含有2.6～3.8mol/L甘油、1.5～2mol/L二甲基亚砜和0.45～0.6mol/L蔗糖的white液体培养液，室温温育10～30min，再将其放入梯度降温盒中；

(3)将带有白蔹种子的梯度降温盒放入低温冰箱中，使其降温盒的温度在‐35℃～‐65℃，降温速度为‐1℃/min，然后取出降温盒，马上将此降温盒放入液氮中，进行液氮低温保存备用。

2.根据权利要求1的方法，其中所述白蔹种子为当年收获鲜种，自然晒干，种子含水量为6～15％。

3.根据权利要求1的方法，其中步骤(2)中所述梯度降温盒中含有100％异丙醇或甘油，可以重复使用。

4.根据权利要求1的方法，其中步骤(3)中所述低温冰箱的温度要求一般在‐70℃以下。

5.根据权利要求1的方法，其中所保存的白蔹种子进行解冻时，若室温超过20℃，将冻存管从液氮中取出，直接利用室温自然解冻；若室温低于20℃，将冻存管从液氮中取出，并置于20～24℃水浴箱中解冻。解冻完后，取出冻存管中白蔹种子，再用自来水或者蒸馏水洗涤3～5次，清洗后白蔹种子直接用于培养。