[发明专利]一种白蔹种子超低温保存方法

说明书

技术领域

本发明属于现代中草药栽培技术领域，具体涉及一种白蔹种子超低温保存方法。

背景技术

白蔹又叫五爪藤、鹅抱蛋、猫儿卵、箭猪腰，属于葡萄科蛇葡萄属多年落叶藤本植物，生长于山坡林下，在我国的东北、华北、华南等地均有分布。白蔹是传统中药材，全草和块状膨大根可入药，其味甘，性微寒，有清热解毒、生肌止疼、消肿的功效，多用于医治痈肿疮疡、烫伤、扭挫伤、蜂窝组织炎、淋巴结炎等。现代医学研究证明，白蔹还具有嫩白肌肤的功效，已作为美容护肤品的添加剂使用。除了药用价值外，白蔹叶形奇特美丽，株形飘逸俊秀，可用来进行墙壁、棚架、凉廊、篱垣、拱门、灯柱、裸岩、假山、树干、屋顶、阳台等垂直面的绿化，具有很好的装饰性和观赏性。若将其粗壮肥大、形态迥异的块根栽植于盆钵之中，便可成为—盆根奇叶美、效果独具的观赏盆景。也可作为农药；根茎含淀粉，可酿酒。由于白蔹具有重要的经济价值，近年来人们对其进行大肆采挖，使野生白蔹的分布量迅速减少，现在已经很难采挖到野生的白蔹，对白蔹种质资源破坏很严重，目前对中药材种质资源方面研究较少。

目前种质资源保存方式为常温、低温保存白蔹种子两种方式。常温保存中药材种子，每保存一段时间就需要重新繁种更新，因为中药材种子经过一段时间的保存，活力降低很快；低温保存中药材种子，在中国，建立了国家中期库和国家作物种质库，国家中期库保存的温度为4℃左右，相对湿度小于65％，一般设计贮藏种子的寿命为5～10年，国家种质库为种质长期保存库，库中的温度为-18℃左右，相对湿度小于50％，设计贮藏寿命达20年以上，也就是说种质在长期库中保存，活力同样随着时间的推移降低，种质20年后一般需要更新繁种，不是永久的保存。

因此，为了安全保存白蔹种质资源，研究探索一种安全而长久保存白蔹种质资源的方法很有意义，它能够减少或者避免种子更新繁种，省时省力，阻断繁种更新的过程中种质间基因漂移等产生种质变异，保证种质的遗传稳定性。

发明内容

本发明的目的是提供一种适合于白蔹种子的超低温保存法，该方法能够补充现在白蔹种质资源保存技术的不足，可以长期安全的保存白蔹种质资源，为白蔹种质资源保存提供一条新的有效的技术途径。

本发明的目的是提供一种白蔹种子超低温保存方法，包括步骤以下：

(1)室温下将白蔹种子用70％酒精进行消毒，用1～4％羧甲基纤维素钠溶液进行浸种处理10～30min，用white液体培养基浸泡20～60min后，再加入终浓度为1.5～2.5mol/L甘油和1～1.5mol/L二甲基亚砜，继续处理20～60min后，取出处理过的白蔹种子；

(2)处理过的白蔹种子放入冻存管中，再加入含有2.6～3.8mol/L甘油、1.5～2mol/L二甲基亚砜和0.45～0.6mol/L蔗糖的white液体培养液，室温温育10～30min，再将其放入梯度降温盒中；

(3)将带有白蔹种子的梯度降温盒放入低温冰箱中，使其降温盒的温度在-35℃～-65℃，降温速度为-1℃/min，然后取出降温盒，马上将此降温盒放入液氮中，进行液氮低温保存备用。

在一个具体方案中，步骤(2)中所述梯度降温盒中含有100％异丙醇或甘油，可以重复使用。

在一个具体方案中，步骤(3)中所述低温冰箱的温度要求一般在-70℃以下。

上述所保存的白蔹种子进行解冻时，若室温超过20℃，将冻存管从液氮中取出，直接利用室温自然解冻；若室温低于20℃，将冻存管从液氮中取出，并置于20～24℃水浴箱中解冻。解冻完后，取出冻存管中白蔹种子，再用自来水或者蒸馏水洗涤3～5次，清洗后白蔹种子直接用于培养。

技术效果

1、本发明提供的超低温保存白蔹种子方法具有工艺简单、稳定性可靠、保存后种子发芽率和鲜种的发芽率无显著性差异，发芽试验结果表明超低温保存后白蔹种子发芽率高达95％以上。

2、本发明具有长期、有效、安全保存白蔹种子，是白蔹种质资源长期保存的最有效方法。

具体实施方式

下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任何一个或类似实例。

实施例1