[发明专利]一种荧光免疫磁微粒定量检测O型口蹄疫抗体试剂盒

权利要求书

1.一种荧光免疫磁微粒定量检测O型口蹄疫抗体试剂盒，其特征在于由O型口蹄疫抗体阴性血清、O型口蹄疫抗体阳性血清、VP1包被磁珠、生物素化羊抗猪抗体、链霉亲和素标记荧光物质、洗涤液和增强液组成。

2.如权利要求1所述的荧光免疫磁微粒定量检测O型口蹄疫抗体试剂盒，其特征在于，所述的VP1包被磁珠为带有官能团修饰的直径1~3μm的超顺磁珠与VP1蛋白的共价偶联物，其中所使用的磁珠为羧基磁珠、氨基磁珠、羟基磁珠、甲苯磺酰基磁珠、NHS磁珠、链酶亲和素磁珠、蛋白A磁珠、蛋白G磁珠、抗小鼠IgG磁珠、亲水磁珠、疏水磁珠中的一种或几种。

3.如权利要求1所述的荧光免疫磁微粒定量检测O型口蹄疫抗体试剂盒，其特征在于，所述的荧光物质为镧系鳌和物，为铕、钐、铽、镝组成的螯合物。

4.如权利要求1所述的荧光免疫磁微粒定量检测O型口蹄疫抗体试剂盒，其特征在于，所述VP1包被磁珠的制备方法为：吸取羧基磁珠到离心管中，将离心管放置在磁力架中，利用磁力架进行磁珠和缓冲液的分离，用0.1M pH5.0的2-（N-吗啡啉）乙磺酸洗涤磁珠3~5次；向上述洗涤好的磁珠中加入0.1M pH5.0的2-（N-吗啡啉）乙磺酸，加入10mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸溶液和50mg/ml N-羟基琥珀酰亚胺，室温震荡反应0.5~1小时；上述活化好的磁珠置于磁力架上，弃上清，收集活化好的磁珠；加入VP1，室温持续旋转孵育30~240分钟；上述磁珠置于磁力架上，弃上清，收集免疫磁珠；加入含有1%BSA 0.05MpH 8.0的Tris-HCl缓冲液，重悬磁珠，封闭未偶联VP1的活化羧基位点，反应30~60min；上述磁珠置于磁力架上，弃上清，加入免疫磁珠保存液；所述的免疫磁珠保存液为含5%BSA，10%蔗糖，0.1%Tween-20和0.1%聚乙烯吡咯烷酮的0.05M pH 8.0的Tris-HCl缓冲液。

5.如权利要求1所述的荧光免疫磁微粒定量检测O型口蹄疫抗体试剂盒，其特征在于，所述的生物素化羊抗猪抗体的制备方法为：用0.1 M pH 8.0碳酸氢钠缓冲液对羊抗猪抗体充分透析；用DMSO 溶解生物素；向蛋白质溶液加入生物素溶液, 在室温下持续搅拌，保温2～4小时；在4℃，对PBS充分透析，以除去游离的生物素；样品加入5%BSA，将结合产物置4℃，避光保存；将上述制备好的生物素化羊抗猪抗体稀释，使羊抗猪的终浓度为0.001~0.005g/L。

6.如权利要求1所述的荧光免疫磁微粒定量检测O型口蹄疫抗体试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素标记荧光物质的SA标记铕的制备方法为：取出SA置于10KD超滤离心管，离心，弃去滤液；加入标记缓冲液，离心，弃去滤液；重复此操作4~5次；将离心管滤膜反转，离心，收集浓缩的抗体；加入标记缓冲液，静置3~5min，再将离心管滤膜反转，离心，收集浓缩的SA；按照质量比SA：铕螯合物DTTA-Eu=3:1的比例充分混匀，放入旋转培养器，室温反应16~24小时；用Sepharose CL-6B凝胶柱纯化SA-Eu3+，然后加入SA-Eu3+保存剂，使BSA和Proclin300终浓度为0.2%，经0.22μm滤膜过滤，4℃储存备用；将上述制备好的SA-Eu3+稀释，使SA的终浓度为0.005~0.010g/L。

7.如权利要求1所述的荧光免疫磁微粒定量检测O型口蹄疫抗体试剂盒，其特征在于，所述洗涤液的配方为：0 .8~1 .5% Tween-20，0.02%Proclin300，pH 7.2~7.5 0.05M Tris-Hcl缓冲液。

8.如权利要求1所述的荧光免疫磁微粒定量检测O型口蹄疫抗体试剂盒，其特征在于，所述增强液的配方为：0.03%乙酸钠、0.0001~0.0005%β-NTA、0.0024% TOPO 、0.08%醋酸、0.1%无水乙醇、0.05%的Triton X-100的水溶液。