[发明专利]一种抗肿瘤NK细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种抗肿瘤NK细胞，其特征在于：其为经嵌合共刺激转换受体改造的NK细胞；所述的嵌合共刺激转换受体由PD-1胞外段、NKG2D跨膜及胞内段，以及共刺激分子41BB胞内段组成；所述嵌合共刺激转换受体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示；其编码基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。

2.权利要求1所述的抗肿瘤NK细胞的制备方法，包括以下步骤：

1)合成嵌合共刺激转换受体编码基因；

2)构建重组慢病毒载体；

3)慢病毒的包装；

4)慢病毒侵染NK细胞。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)合成嵌合共刺激转换受体编码基因：设计特异性引物，分别对PD-1胞外段、NKG2D跨膜及胞内段、共刺激分子41BB胞内段的编码基因进行PCR扩增，所得扩增产物进行顺序连接，得到所述的嵌合共刺激转换受体编码基因；

2)构建重组慢病毒载体：将嵌合共刺激转换受体编码基因克隆到慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP上，得到所述的重组慢病毒载体；

3)慢病毒的包装：将所述的重组慢病毒载体以及辅助载体pSPAX2、PMD2G转染感受态细胞，获得所述的慢病毒；

4)慢病毒侵染NK细胞：将所述的慢病毒加入NK细胞进行培养，得到稳定表达所述嵌合共刺激转换受体的抗肿瘤NK细胞。

4.权利要求1所述的抗肿瘤NK细胞在制备抗肿瘤药物中的应用。