[发明专利]一种抗肿瘤NK细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗肿瘤NK细胞及其制备方法和应用。该抗肿瘤NK细胞为经嵌合共刺激转换受体改造的NK细胞；所述的嵌合共刺激转换受体由PD‑1胞外段、NKG2D跨膜及胞内段，以及共刺激分子41BB胞内段组成。本发明所述的抗肿瘤NK细胞，采用嵌合共刺激转换受体对NK细胞进行改造，能够提高NK细胞的抗肿瘤治疗效果，实现对实体瘤的特异性识别和杀伤，并且不会引起机体过激的免疫应答反应。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体的说，涉及一种抗肿瘤NK细胞及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，肿瘤免疫细胞治疗因其显著的疗效而在肿瘤治疗中备受瞩目，特别是基于嵌合抗原受体改造的T细胞(CAR-T)，在血液系统恶性肿瘤的临床治疗展现出良好的靶向性、杀伤力和持久性，使之成为肿瘤免疫治疗领域最令人信服的突破。然而，尽管CAR-T技术研发不断取得进步，但依然面临着诸多挑战，主要障碍之一为CAR-T虽然具备强大的杀死癌细胞的能力，但其本身所引起的过强免疫应答反应潜在威胁患者生命。并且无论CAR-T或是TCR-T(T细胞受体嵌合型T细胞)等免疫细胞技术，迄今为止对实体瘤的治疗鲜有奏效，而治疗实体瘤恰是抗肿瘤的真正主战场。因此，如何克服CAR-T技术的弊端以及如何能赋予免疫细胞对实体瘤细胞的精准识别与特异杀伤，成为免疫细胞治疗亟待解决的问题。

NK细胞(自然杀伤细胞)是机体重要的免疫细胞，约占健康人外周血淋巴细胞总数的10％。NK细胞在实体瘤发生发展的早期免疫反应和免疫监视过程中发挥重要作用，为机体抵抗肿瘤的第一道防线，利用NK细胞进行临床治疗已有较长历史。与T细胞相比，NK细胞具有许多自身的免疫特性和优势：一是NK细胞具有不受HLA(人白细胞抗原)限制的非特异性肿瘤细胞杀伤作用，主要通过表面细胞毒受体，触发穿孔素和颗粒酶的释放，产生细胞毒因子和TNF(肿瘤坏死因子)等细胞因子，而不产生IL-2等细胞因子，避免造成致死性细胞因子风暴；二是NK细胞还可通过CD16与抗体Fc片段结合，诱发ADCC(抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用)的特异性杀伤作用；三是NK细胞的杀伤作用具有连续性，可从一个目标移向另一个目标，杀死多达7～10个肿瘤细胞，而T细胞缺乏这种连续杀伤性；四是NK细胞寿命短暂，发挥功效后很快会消失，无需考虑类似CAR-T细胞需要自杀基因来限制其持久副作用。由于这些有利因素，NK细胞用于患者治疗时有效并且安全。

免疫检查点是指一类免疫抑制性分子，通过共抑制或共刺激信号一系列途径来调节免疫细胞活性，防止过度免疫激活和确保自身耐受，从而避免正常组织损伤和破坏。PD-1(程序性细胞死亡蛋白-1)是其中一个主要的抑制分子，它具有一个ITSM(免疫受体酪氨酸转换基序)结构，在与配体PD-L1结合后能够磷酸化并引发胞内SHP-2酪氨酸磷酸酶，从而引发抗原受体复合体的去磷酸化。因此，由PD-1/PD-L1介导免疫负调控机制可以抑制MHC-TCR信号通路的激活，控制T细胞和NK细胞的增殖、细胞因子分泌或对同类抗原的应答反应。大量研究证据表明，PD-1主要表达于活化的免疫细胞表面，其配体PD-L1在正常组织中表达有限，但在大部分实体瘤细胞和免疫抑制细胞的表达显著增加，肿瘤利用PD-1/PD-L1负调控机制实现对抗肿瘤免疫反应的逃逸。因此，阻断这条免疫抑制信号通路成为实体瘤免疫治疗是一个重要路径。