[发明专利]一种稻米淀粉粒断面的制备及观察分析方法

权利要求书

1.一种稻米淀粉粒断面的制备及观察分析方法，其特征在于：选择暗胚乳和糯稻稻谷；手动剥壳获得糙米或者选择机械脱壳、出精后无明显裂纹的精米，并用干冰-液氮混合物速冻；迅速断裂；修块并固定在载物台；将固定好的样品置于离子溅射喷镀仪内喷金镀膜，喷金时间60秒，喷完后立即到扫描电子显微镜上进行观察；将扫描电子显微镜的电压与电流分别调为15kv和10μA，工作距离在7.5-8.0mm之间；在40倍放大倍数下调整扫描区域，在3000倍放大倍数下选择断面平整、清晰的区域进行拍照保存图片，同时在拍照区域内选择孔洞明显的部位进行10000倍拍照和保存图片；利用像素分析软件对保存的图片进行分析，得到单个淀粉粒平均孔洞数目、淀粉粒孔洞的平均直径。

2.根据权利要求1所述的稻米淀粉粒断面的制备及观察分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)样品选择和准备：选择自然干燥或烘干的暗胚乳和糯稻稻谷，手动剥壳获得糙米或者选择机械脱壳、出精后无明显裂纹的精米，选饱满的糙米或精米进行后续试验；

(2)样品断裂：用镊子夹住单粒米样置于干冰-液氮混合物中速冻1-2分钟，取出后迅速用尖头钢丝钳固定籽粒一端，另一端用镊子用力掰断；

(3)修块：选取断面平整的半粒米样，用镊子固定带有断面的一段，用刀片切除断面相对的一部分，并修整切口，使切口平整且与米粒保持垂直；修整后的断面厚度保留2-3mm，修整的断面作粘贴面；

(4)样品固定：用镊子将修整后断面朝下粘在样品台上的导电胶上，确保样品垂直放置且整个操作过程不能用手触碰上断面；

(5)喷金：将粘好的样品置于离子溅射喷镀仪内喷金镀膜，喷金时间60秒，喷完后立即到扫描电子显微镜上进行观察；

(6)扫描电子显微镜观察：将扫描电子显微镜的电压与电流分别调为15kv和10μA，工作距离在7.5-8.0mm之间；在40倍放大倍数下调整扫描区域，在3000倍放大倍数下选择断面平整、清晰的区域进行拍照保存图片，同时在拍照区域内选择孔洞明显的部位进行10000倍拍照和保存图片；

(7)分析：利用像素分析软件对步骤(6)保存的图片进行分析，得到单个淀粉粒平均孔洞数目、淀粉粒孔洞的平均直径。

3.根据权利要求2所述的稻米淀粉粒断面的制备及观察分析方法，其特征在于步骤(7)具体是：首先统计100粒以上可见明显孔洞的淀粉粒中孔洞的数目，计算平均值，得到单个淀粉粒平均孔洞数目；同时，利用ImageJ软件的测量功能进行淀粉粒中间空洞直径的分析，测量100粒以上，计算得到淀粉粒孔洞的平均直径。