[发明专利]一种抗PRRSV的miRNA重组质粒的制备及其应用在审
| 申请号： | 201711312055.6 | 申请日： | 2017-12-12 |
| 公开（公告）号： | CN108504667A | 公开（公告）日： | 2018-09-07 |
| 发明（设计）人： | 徐德全;游祥宾;刘敏;王梦侠;曲一林;高肖肖 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/113;C12N15/85;C12N15/11;A61K48/00;A61K31/7105;A61K39/12;A61P31/14 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 张红兵 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组质粒 制备 重组序列 猪繁殖与呼吸综合征 动物繁殖 细胞水平 共表达 构建 活体 质粒 应用 疫苗 融合 检测 | ||
1.融合猪Let-7家族成员ssc-let-7a、ssc-let-7c、ssc-let-7d、ssc-let-7e、ssc-let-7f、ssc-let-7g、ssc-let-7i和ssc-mir-98前体的重组序列，其特征在于：该重组序列如序列表SEQ ID NO:1所示。
2.猪Let-7家族成员ssc-let-7a、ssc-let-7c、ssc-let-7d、ssc-let-7e、ssc-let-7f、ssc-let-7g、ssc-let-7i、ssc-mir-98的共表达重组质粒pEGFP-N1-Let-7，其特征在于：含有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
3.扩增猪Let-7家族成员ssc-let-7a、ssc-let-7c、ssc-let-7d、ssc-let-7e、ssc-let-7f、ssc-let-7g、ssc-let-7i、ssc-mir-98前体的引物组合，其特征在于：引物组合的序列如下所示：
扩增ssc-let-7a的引物组合：
Ssc‐let‐7a1‐F GAAGATCTTCTAATTCTCAGCATGTTGCTTTGTGC，
Ssc‐let‐7a1‐R GGTAATCCTGGTTCTCCTGTGTAAGAAATGGTAGCTTGCCCGC；
Ssc‐let‐7a2‐F GCGGGCAAGCTACCATTTCTTACACAGGAGAACCAGGATTACC，
Ssc‐let‐7a2‐R CCACTGTTGCTTCAAACTCCTTGATGCTGTCTGGATGCAGATTT；
扩增ssc-let-7c的引物组合：
Ssc‐let‐7c‐F AAATCTGCATCCAGACAGCATCAAGGAGTTTGAAGCAACAGTGG，
Ssc‐let‐7c‐R TCTTGCCAGTCTTCCACTTAACGATGAAGAATTCCTCGATGGC；
扩增ssc-let-7d的引物组合：
Ssc‐let‐7d‐F GCCATCGAGGAATTCTTCATCGTTAAGTGGAAGACTGGCAAGA，
Ssc‐let‐7d‐R AGGTGGAAGGGGACAGGTAACAAGGAAACTGGTTACCGTGG；
扩增ssc-let-7e的引物组合：
Ssc‐let‐7e‐F AGACTTGCTGCATTTTGTTT GGCTGAGGTAGGAGGTTG，
Ssc‐let‐7e‐R GCTGAGGTAGTAGTTTGTGCTGTATACAACCTCCTACCTCAGCCC；
扩增ssc-let-7f的引物组合：
Ssc‐let‐7f1‐F GGGAAACCAGGTAATGGGGAGAGAACACAGCACAGCATAAT，
Ssc‐let‐7f1‐R TATCCCCACCCAACCTGTATGTGGGCTGAAGATGAACACT；
Ssc‐let‐7f2‐F AGTGTTCATCTTCAGCCCAC ATACAGGTTGGGTGGGGATA，
Ssc‐let‐7f2‐R GGCTGAGGTAGGAGGTTG AAACAAAATGCAGCAAGTCT；
扩增ssc-let-7g的引物组合：
Ssc‐let‐7g‐F CTCTAGAAGGGCAGGAGGCATCCTCCAACGCTCCGTATCCT，
Ssc‐let‐7g‐R ATTATGCTGTGCTGTGTTCTCTCCCCATTACCTGGTTTCCC；
扩增ssc-let-7i的引物组合：
Ssc‐let‐7i‐F CAAACTACTACCTCAGCCAGCAGCACAAACTACTACCTCAGCCAG，
Ssc‐let‐7i‐R CTGCAGAACCAATGCATTGG ATAACTGCGCAAGCTACTGCCTTGC；
扩增ssc-mir-98的引物组合：
Ssc‐mir‐98‐F CCACGGTAACCAGTTTCCTTGTTACCTGTCCCCTTCCACCT，
Ssc‐mir‐98‐R AGGATACGGAGCGTTGGAGGATGCCTCCTGCCCTTCTAGAG。
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