[发明专利]一种提高文库构建试剂稳定性的方法在审
申请号: | 201711313523.1 | 申请日: | 2017-12-12 |
公开(公告)号: | CN108424904A | 公开(公告)日: | 2018-08-21 |
发明(设计)人: | 金晶;王西龙 | 申请(专利权)人: | 南京迪格诺斯生物技术有限公司 |
主分类号: | C12N9/96 | 分类号: | C12N9/96 |
代理公司: | 南京常青藤知识产权代理有限公司 32286 | 代理人: | 金迪 |
地址: | 210000 江苏省南京市*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 文库构建 封装 工具酶 保存 试剂稳定性 常温下 基因测序技术 化学试剂 纳米胶囊 物流仓储 原位聚合 电荷 交联剂 酶活性 试剂盒 自交联 降解 吸附 | ||
1.一种提高文库构建试剂稳定性的方法,其特征在于,将文库构建所需要的工具酶进行如下步骤处理:
S1:将工具酶进行纳米胶囊封装保存,封装的方法包括原位聚合封装方法和通过电荷吸附的自交联的封装中的一种;
S2:使用时,加入降解交联剂的化学试剂,破坏纳米胶囊使工具酶具有活性。
2.根据权利要求1所述的提高文库构建试剂稳定性的方法,其特征在于,将步骤S1中所述的工具酶进行封装后,得到液体产品与工具酶反应所需要的Buffer液按一定比例混合进行冻干处理得到冻干粉,保存待用。
3.根据权利要求1或2所述的提高文库构建试剂稳定性的方法,其特征在于,步骤S1中所述的原位聚合封装方法如下:
1):加一定量的N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺到工具酶中,使工具酶被N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺丙烯酰化;
2):以过硫酸铵和N,N,N`,N`-四甲基乙二胺为引发剂,加入一定量的引发剂到步骤1)中所得到的丙烯酰化的工具酶的表面引发自由基聚合;
3):加入一定量的N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺、丙烯酰胺和交联剂的混合物到步骤2)中所得到的反应物中,反应时间大于60分钟得到纳米胶囊包裹的工具酶,其中交联剂为二甲基丙烯酸甘油酯和双(2-甲基丙烯)乙氧基二硫中的一种;
4):用凝胶过滤柱分离纯化得到包裹有纳米胶囊的成品工具酶。
4.根据权利要求3所述的提高文库构建试剂稳定性的方法,其特征在于,使用交联剂是二甲基丙烯酸甘油酯时,则使交联剂降解的化学试剂是低pH的缓冲液;使用交联剂是双(2-甲基丙烯)乙氧基二硫时,则使交联剂降解的化学试剂是DTT(二硫苏糖醇)。
5.根据权利要求3所述的提高文库构建试剂稳定性的方法,其特征在于,N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺、丙烯酰胺和交联剂的混合物的混合摩尔比是3:7:1。
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