[发明专利]一种提高文库构建试剂稳定性的方法

说明书

本发明提供一种提高文库构建试剂稳定性的方法，具体涉及基因测序技术领域，将文库构建所需要的工具酶进行如下步骤处理，S1：将工具酶进行纳米胶囊封装保存，封装的方法包括原位聚合封装方法和通过电荷吸附的自交联的封装中的一种；S2：使用时，加入降解交联剂的化学试剂，使工具酶具有活性。本发明使文库构建试剂盒能够在常温下保存，减少物流仓储的成本，同时保存酶活性的稳定，能够在常温下保存12个月。

技术领域

本发明属于基因测序技术领域，具体涉及一种提高文库构建试剂稳定性的方法。

背景技术

环境对文库构建试剂稳定性影响最大的是工具酶，工具酶的本质是蛋白质，它们对于外界的环境如温度、pH等同样十分敏感，外界因素极易影响氨基酸残基和蛋白质二级结构从而导致蛋白分子结构的改变以及活性的丢失或丧失。因此，文库构建试剂的工具酶需要低温保存，这无疑增大了物流仓储的成本，同时使用过程中反复冻融降低酶的活性。

因此急需一种提高文库构建试剂稳定性的方法，使其能够在常温下保存，减少物流仓储的成本，同时保存酶活性的稳定。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高文库构建试剂稳定性的方法，使其能够在常温下保存，减少物流仓储的成本，同时保存酶活性的稳定。

本发明提供了如下的技术方案：

一种提高文库构建试剂稳定性的方法，将文库构建所需要的工具酶进行如下处理：

S1：将工具酶进行纳米胶囊封装保存，封装的方法包括原位聚合封装方法和通过电荷吸附的自交联的封装中的一种；

S2：使用时，加入降解交联剂的化学试剂，破坏纳米胶囊使工具酶具有活性。

优选的，将步骤S1中所述的工具酶进行封装后，得到液体产品与工具酶反应所需要的Buffer液按一定比例混合进行冻干处理得到冻干粉，保存待用。

优选的，步骤S1中所述的原位聚合封装方法如下：

1)：加一定量的N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺到工具酶中，使工具酶被N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺丙烯酰化；

2)：以过硫酸铵和N,N,N`,N`-四甲基乙二胺为引发剂，加入一定量的引发剂到步骤1)中所得到的丙烯酰化的工具酶的表面引发自由基聚合；

3)：加入一定量的N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺、丙烯酰胺和交联剂的混合物到步骤2)中所得到的反应物中，反应时间大于60分钟，得到纳米胶囊包裹的工具酶，其中交联剂为二甲基丙烯酸甘油酯和双(2-甲基丙烯)乙氧基二硫中的一种；

4)：用凝胶过滤柱分离纯化得到包裹有纳米胶囊的成品工具酶。

优选的，使用交联剂是二甲基丙烯酸甘油酯时，则使交联剂降解的化学试剂是低pH的缓冲液；使用交联剂是双(2-甲基丙烯)乙氧基二硫时，则使交联剂降解的化学试剂是DTT(二硫苏糖醇)。

优选的，N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺、丙烯酰胺和交联剂的混合物的混合摩尔比是3:7:1。

优选的，步骤S1中所述的通过电荷吸附的自交联的封装方法如下：

第一步：通过加入pH为8.0-8.5的溶液使工具酶带负电荷；

第二步：富含正电荷基团的高分子聚合物和琥珀酰亚胺酯修饰聚乙二醇以一定比例混合一段时间后，清洗分离，可得部分正电荷基团被聚乙二醇化的高分子聚合物；

第三步：再在第二步所得的聚合物中加入一定量的特劳特试剂，反应一段时间后，得含有巯基、聚乙二醇和正电荷基团修饰的高分子聚合物；