[发明专利]一种靶向无痕释放药物缀合物及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种靶向无痕释放药物缀合物及其制备方法与应用。具体公开了一种靶向无痕释放药物缀合物，其结构为T‑L‑D，T代表靶向基团，L代表接头，D代表活性成分，其中，T选自RGD肽、环RGD肽，RGD肽衍生物、RGD环肽衍生物、叶酸、穿膜肽、核酸适体、荧光染料；D为具有叔胺基的药物活性成份，优选为柯义巴肽A、柯义巴肽A衍生物；L为A‑BC‑E，BC代表酶切位点。本发明使用具有靶向作用、易合成修饰的环RGD代替价格昂贵、不易合成的抗体作为靶向分子，制备更简单，也达到了很高的特异性靶向作用，同时在酶的特异性切割作用下，通过对氨基苄基季铵盐的自我消除，实现药物活性成分的无痕释放。

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种靶向无痕释放药物缀合物及其制备方法与应用。

背景技术

柯义巴肽A(Coibamide A，Coi A)是一种高度N-甲基化的天然环酯肽，对肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、白血病以及中枢神经癌等细胞都具有纳摩尔级的细胞毒性，同时对乳腺、中枢神经以及卵巢癌细胞具有较好的组织选择性。但是由于Coi A水溶性较差，不易修饰，并且体外实验表明Coi A对正常细胞也具有较大的毒性，因此Coi A作为药物应用于体内研究时受到极大的限制。研究表明，对氨基苄基季铵盐能在酶特异性切割酰胺键或还原剂还原二硫键时，发生自我消除反应，无痕释放叔胺或芳香胺类药物。本课题组的研究表明CoiA的类似物Coi A3与Coi A具有同等的细胞毒性，但合成较Coi A简单。因此本发明拟采用Coi A3为模型，将Coi A3与对酶或还原剂敏感的含有对氨基苄基的臂(linker)连接形成季铵盐，然后将具有靶向作用的环RGD连接在臂的另一端，形成RGD-Coi A3缀合物。当RGD-CoiA3被靶向运输到肿瘤细胞内时，细胞内过表达的酶cathepsin B或谷胱甘肽将连接药物的linker特异性切割，对氨基苄基发生自我消除，从而无痕释放药物。

有效的药物递送体系能够将毒性大，副反应多的疏水药物高效、快速地运送至肿瘤部位。目前研究者们多采用脂质体、聚合物、多肽、纳米材料等，通过包埋或者共价偶联疏水药物的方法形成纳米组装体，实现抗癌药物的靶向递送，提高药物利用度，降低药物毒性。2016年，Nature Chemistry报道了一种抗体-药物缀合物无痕释放药物的方法(NatureChemistry，2016，8，1112-1119)。该方法针对不易修饰的叔胺和芳香胺类药物，这些药物能够与对氨基苄基形成季铵盐，在酶或氧化还原特异性切割linker时，对氨基苄基通过1,6消除，自我牺牲，无痕释放药物。然而该方法采用抗体作为靶向分子，虽然抗体特异性强，但其价格昂贵，不易合成，因此需要发展一种制备简单、价格经济的刺激响应的药物缀合物，为新药开发提供新的模式。Coi A是2008年从巴拿马海洋蓝藻Leptolyngbya sp.中分离得到的一种海洋天然产物。它是一种富含多个N-甲基化氨基酸的环脂肽，对多种癌细胞具有低的纳摩尔级的细胞毒性，是具有潜在优势的抗癌先导化合物。但是Coi A的水溶性差，不易修饰，毒性大，使其发展至临床药物受到限制。本课题组自2015年对Coi A的结构做出正确修正后，不断地对其结构进行改造，合成了一系列Coi A类似物，药效关系研究表明Coi A3(N-Me-Ser(Me)-OH替换为N-Me-Ala-OH)与Coi A具有同等的细胞毒性，合成相对较简单。因此本发明将利用对氨基苄基能够与叔胺形成季铵盐，并在酶等特定条件下发生自我消除，无痕释放叔胺类药物的特点，采用具有靶向作用、易合成得到的小分子肽环RGD作为靶向分子，先将Coi A3连接在含有对氨基苄基和特异性切割位点的linker的一端形成季铵盐，得到的物质再与环RGD连接，形成RGD-Coi A3缀合物。该缀合物被靶向递送至肿瘤细胞，胞内高表达的酶cathepsin B或谷胱甘肽特异性切割linker，Coi A3被无痕释放。