[发明专利]用于检测猪圆环病毒2型和圆环病毒3型的双重PCR引物、检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测猪圆环病毒2型和圆环病毒3型的双重PCR引物，其特征在于，所述引物根据检测猪圆环病毒2型和圆环病毒3型的高度保守的特异性序列设计双重PCR引物，其中，猪圆环病毒2型的检测引物，由SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列的正向引物和SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列的反向引物组成，检测猪圆环病毒3型的检测引物，由SEQ ID NO：11所示的核苷酸序列的正向引物和SEQ ID NO：12所示的核苷酸序列的反向引物组成。

2.如权利要求1所述的检测猪圆环病毒2型和圆环病毒3型的双重PCR引物在制备检测猪圆环病毒的制品中的应用。

3.一种用于检测猪圆环病毒2型和圆环病毒3型的双重PCR检测方法，包括以下步骤：

1)从待检样品制备基因组总DNA；

2)以制备的基因组DNA为模板，利用如权利要求1所述的双重PCR引物，在同一反应体系中进行双重PCR扩增，得到扩增产物；

3)扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，获得检测结果。

4.如权利要求3所述的用于检测猪圆环病毒2型和圆环病毒3型的双重PCR检测方法，其特征在于，双重PCR的反应体系总体积为50μl，包括：

1)10μM的SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12所示核苷酸序列各 1μl；

2)10×ExPCR Bμffer 5.0μl；

3)dNTP Mixtμre 4.0μl；

4)ExTaq DNA聚合酶 1.0μl；

5)RNase free ddH₂0 32.0μl；

6)待测样品的DNA模板 4μl。

5.如权利要求3所述的用于检测猪圆环病毒2型和圆环病毒3型的双重PCR检测方法，其特征在于，双重PCR的程序包括：94℃预变性4min后进入循环；94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环结束后；72℃终延伸10min。

6.如权利要求3所述的用于检测猪圆环病毒2型和圆环病毒3型的双重PCR检测方法，其特征在于，所述的双重PCR检测方法的检测灵敏度可达10²拷贝/μL。

7.一种用于检测猪圆环病毒2型和圆环病毒3型的双重PCR检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的检测猪圆环病毒2型和圆环病毒3型的双重PCR引物，还包括10×PCR buffer、dNTP、MgCl₂、Taq酶、阳性质控品、阴性质控品。

8.如权利要求7所述的用于检测猪圆环病毒2型和圆环病毒3型的双重PCR检测试剂盒，其特征在于,所述的检测试剂盒可特异性检测鉴定猪圆环病毒2型和圆环病毒3型，不能检测出猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪塞内加谷病毒、猪蓝耳病病毒、猪丁型冠状病毒中的一种或多种。

9.一种如权利要求1所述的双重PCR引物、如权利要求3所述的双重PCR检测方法、如权利要求7所述的双重PCR检测试剂盒在猪圆环病毒检测中的应用，其中，所述检测不以疾病诊断治疗为目的。