[发明专利]一种通过PCR技术判定土豆是否辐照的方法

说明书

本发明提供一种通过PCR技术判定土豆是否辐照的方法，其首先提取未辐照以及待测土豆的DNA样本，使用4对鉴别引物对DNA样本进行实时定量PCR的Livak分析，获得DNA片段组合间倍数关系，通过两种鉴别标准鉴别样本是否符合辐照损伤特征；然后使用2对引物对符合辐照特征的DNA样本进行实时PCR分析，获得DNA片段组合间倍数的对数，通过两种判定标准判定待测土豆样本是否经过辐照处理，最终实现对土豆的定性辐照鉴定。与“彗星DNA法”相比，可提高辐照食品定性鉴定的灵敏度和结果可靠性，对辐照食品生产和辐照加工企业的质量安全控制、食品安全监督部门、进出口检验检疫部门食品辐照鉴定业务均有可行性和重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及食品辐照检测技术领域，特别涉及一种通过PCR技术判定土豆是否辐照的方法。

背景技术

关于食品的定性辐照鉴定技术，是指判定食品样本其是否经过辐照处理的多种检测方法。辐照处理可杀灭食品内的有害微生物，抑制其发芽过程，延长食品货架期；另一方面，需辐照食品未经过有效辐照或辐照剂量超出安全质量标准时，会造成食品品质下降，对消费者健康造成威胁。随着全球范围内辐照食品及辐照加工产业的发展，消费者对食品安全需求不断提升，对辐照食品鉴定技术的可靠性要求愈发凸显。目前实际应用中的辐照食品鉴定技术按原理可划分为物理方法、化学方法和生物方法三类。物理方法主要包括电子自旋共振(ESR)法、热释光(TL)法、光释光(PSL)法等；化学方法主要包括挥发性碳氢化合物法、过氧化值法、超临界流体抽取法、LC-MS及GC-MS联用检测技术等；生物方法主要包括了直接表面荧光过滤技术/平板计数(DEFT/APC)法，基于“DNA变异”原理的彗星DNA法等。这种辐照食品鉴定方法多种并存的状况，是因为各种检测技术对测试样本的范围限制严格，尚不存在一种可对所有辐照食品实现定性或定量检测的通用方法。以我国最新颁布(2017年6月)的辐照食品鉴定国标为例：1)GB 21926-2016(含脂类辐照食品鉴定2-十二烷基环丁酮的气相色谱-质谱分析法)、2)GB 31642-2016(辐照食品鉴定电子自旋共振波谱法)、3)GB31643-2016(含硅酸盐辐照食品的鉴定热释光法)、4)GB 23748-2016(辐照食品鉴定筛选法)，GB 21926-2016针对一种2-十二烷基环丁酮检测，适用于脂肪含量大于1％的辐照食品；GB 31642-2016适用于辐照含纤维素食品和含骨食品的鉴定,涉及产品包括干果、香辛料、新鲜水果蔬菜、谷物和含骨动物产品等；GB 31643-2016适用于可分离硅酸盐的香辛料、脱水蔬菜、新鲜水果和蔬菜等食品；GB 23748-2016中的DNA彗星试验法适用于动物产品、谷物、坚果、果蔬的辐照鉴定，但仅能对辐照样本进行辅助筛选，无法定性，也无法定量鉴定。

由于生鲜食品中DNA核酸含量充裕，且固定物种的总DNA中特定片段间的分布数量相对稳定，DNA变异法发展潜力实际非常巨大。但相较于物理和化学辐照鉴定方法的迅速发展，生物方法的研究相对滞后。我国现行国标采用的彗星DNA检测技术中，将单个细胞内的核酸染色体作为检测对象，将DNA断裂片段的形态观测作为结果进行判断分析，只能进行待测样本的辅助筛选，不能认定样本是否辐照，必须和其他方法结果联合判定，更无法做到定量评估。该方法的另一个不足是无法排除加热或其他条件造成的假阳性结果，若食品中大量存在的天然细胞残核及细胞膜不完全溶解时，会对结果造成严重干扰。

综合以上情况，为改良“彗星DNA法”原有辐照鉴定技术的不足之处，有必要且亟需研发更为可靠的鉴定技术。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明通过以下技术方案实现：

一种通过PCR技术判定土豆是否辐照的方法，包括下述步骤：

A、提取样本总DNA：

取同一批次的未辐照土豆样本、待检土豆样本至少各三个，分别提取未辐照土豆样本总DNA和待检土豆样本总DNA；

B、获取未辐照土豆样本总DNA中待检测核酸片段之间分布数量的相对倍数的对数的平均数：