[发明专利]杨树型蜂胶真伪快速鉴别的核磁指纹图谱法

说明书

本发明提供一种杨树型蜂胶真伪快速鉴别的核磁指纹图谱法，具体涉及蜂胶鉴别技术领域，包括如下步骤：S1、将纯蜂胶样品溶解处理后送入核磁共振波谱仪进行检测，得到纯蜂胶的核磁指纹图谱；S2、重复S1步骤，得到纯杨树胶的核磁指纹图谱；S3、将新鲜杨树芽胶切碾成小颗粒，重复S1步骤，得到杨树芽胶的核磁指纹图谱；S4、将毛胶切碾成小颗粒，重复S1步骤，得到毛胶的核磁指纹图谱；S5、重复S1步骤，得到待验蜂胶的核磁指纹图谱；S6、将待验蜂胶的核磁指纹图谱与纯蜂胶、纯杨树胶、杨树芽胶和毛胶的核磁指纹图谱进行比较,判断真假。本发明具有仪器精密度高，操作简便，样品用量少，检测速度快，溶剂耗量小的优点。

技术领域

本发明属于蜂胶鉴别技术领域，具体涉及一种杨树型蜂胶真伪快速鉴别的核磁指纹图谱法。

背景技术

蜂胶是蜂蜜采集特定植物分泌的树脂，再混合蜂蜡及腺体分泌物等物质，最终涂抹在蜂箱内壁形成的一种粘性物质。中国蜂胶是杨树型蜂胶，目前国内市场上最普遍的蜂胶掺假有通过提取色形味相似、化学成分基本相似但价格低廉、生理活性差的杨树芽胶来冒充蜂胶，或在蜂胶中加入杨树胶，人为添加黄酮以提高蜂胶产品的总黄酮含量。此外，由于蜂胶组成成分存在高度复杂性(>300种成分)，现报道的有关蜂胶掺假的鉴别方法的基本原理都是研究蜂胶和/或杨树胶中某些组成成分及其含量的差异，通过气相或液相色谱技术寻找可以区分两者的标志性物质。气相色谱主要针对蜂胶中的挥发性组分，检测不全面，因此我国蜂胶行业区分蜂胶与杨树芽胶胶的质量标准则主要依靠高效液相色谱法，但该方法尚存在分离度不够、只检测具有紫外吸收特性的成分、流动相溶剂消耗量大、仪器分析时间长等缺点，因而从环保经济的角度看并不具有优势。此外，色谱方法提供的某些特征标记物一旦被攻破，不良厂家便会以此对假蜂胶做文章，因而掺假检测难度也随之提高。核磁技术与色谱法相比具有仪器精密度高，操作方便，样品用量少，检测速度快等优点，因此可以考虑采用核磁技术进行鉴别检测。

专利一种利用液相指纹图谱鉴别蜂胶真假的方法(申请号为200510060230.8)，公开了一种利用液相指纹图谱鉴别蜂胶真假的方法，该方法主要应用于蜂胶与杨树胶的鉴别，用真空干燥法测定蜂胶固形物含量，然后称取适量该蜂胶提取溶液，用流动相进行定容，混匀，用滤膜过滤，上液相色谱仪分析，采集0-20min的色谱图，得到该蜂胶的色谱图，再用同样的方法得到纯蜂胶和杨树胶的色谱图，将三者进行比较，判断蜂胶的真假。该发明方便快捷、效果好、耗费少、准确性高的优点。然而该发明采用液相色谱，仍存在分离度不够、只检测具有紫外吸收特性的成分、流动相溶剂消耗量大、仪器分析时间长等缺点。

因此，急需一种仪器精密度高，操作简便，样品用量少，检测速度快，重现性好，溶剂耗量小的杨树型蜂胶真伪快速鉴别的核磁指纹图谱法。

发明内容

为了解决现有蜂胶各种鉴别方法存在的分析时间长，溶剂耗量大等问题，本发明的目的是提供一种杨树型蜂胶真伪快速鉴别的核磁指纹图谱法，具有仪器精密度高，操作简便，样品用量少，检测速度快，重现性好，溶剂耗量小的优点。

本发明提供了如下的技术方案：

杨树型蜂胶真伪快速鉴别的核磁指纹图谱法，包括如下步骤：

S1、将纯蜂胶样品用无水乙醇超声溶解，收集上层提取液，并对残渣用无水乙醇再次提取，合并上层提取液后进行离心，收集上层液体，用氮气吹干，称量一定量的吹干提取物，用含0.03％甲基硅烷的氘代二甲基亚砜溶剂溶解，溶解后移至核磁管送入核磁共振波谱仪进行检测，得到纯蜂胶样品的核磁指纹图谱；

S2、用纯杨树胶样品代替纯蜂胶样品，重复S1步骤，得到纯杨树胶样品的核磁指纹图谱；

S3、将新鲜杨树芽胶切碾成小颗粒，用杨树芽胶样品代替纯蜂胶样品，重复S1步骤，得到杨树芽胶样品的核磁指纹图谱；

S4、将毛胶切碾成小颗粒，用毛胶样品代替纯蜂胶样品，重复S1步骤，得到毛胶样品的核磁指纹图谱；