[发明专利]28个短串联重复序列的复合扩增体系、试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，涉及人类常染色体28个短串联重复序列复合扩增体系，该体系具体涉及利用常染色体上具有多态性的遗传标记、通过聚合酶链式反应进行复合扩增的荧光检测试剂盒，该体系可以对人类常染色体进行快速准确的STR分型判断，进而为法医个体识别和亲子鉴定提供判断依据。

背景技术

人类基因组STR(短串联重复序列)是以几个碱基为核心单位串联重复形成的DNA遗传中较稳定存在的序列。不同种族、不同人群甚至不同个体之间的区分是通过核心单位序列和重复数的差异，这也构成了STR的遗传多态性。在基因组中,平均每15～20kb就有一个STR位点,占基因组的10％，多存在于非编码区及内含子中，重复单位为2～6bp，重复次数10～60次,片段大小在70～500bp,并按孟德尔规律呈共显性遗传。因此STR复合扩增检测技术可以广泛应用于法医个体识别、亲子鉴定等领域。

自本世纪80年代中期以来,短串联重复序列(Short Tandem Repeats,STR)检验已经成为法庭科学鉴定中最常用、发展最成熟的技术,已被广泛地应用于各类案件检验。STR数据成为各国法庭科学数据库的主要构成，以便对犯罪嫌疑人进行对比和排查。目前所采用的试剂盒大多数是以美国FBI选择的13个CODIS(Combined DNA Index System)：CSF1PO,FGA,TH01,TPOX,vWA,D3S1358,D5S818,D7S820,D8S1179,D13S317,D16S539,D18S51,D21S11，但是在某些鉴定中，需要更多的基因座提供更多的信息量，以避免在一些案件中可能发生的误判。

另外现在市面上所售商品试剂盒的设计与所使用的遗传分析仪是相适应的，由于现在常用的遗传分析仪采用毛细管电泳、五色荧光激发采集信号达到检测的目的，所以选用的引物荧光标记主要是五色荧光标记检测系统。但是随着相应的工业及软件技术的革新，六色荧光激发采集系统与毛细管电泳的结合，催生相应的STR分型检测试剂盒的升级换代。同时由于同一检测系统荧光标记的增加使得可以同步检测的STR数目增加，这就弥补了五色荧光标记系统STR位点数目不能满足的缺陷。

发明内容

为了克服上述缺陷，本发明提供一种28个短串联重复序列的复合扩增体系及试剂盒和应用，具有六色荧光标记，灵敏度极高，在低浓度DNA为模板时均可检测获得完整的基因分型图谱。本发明所采用的位点组合比常规的五色荧光标记扩增系统的位点数目多，且这些位点具有极高的个体识别率和非父排除率，可用于法医个体识别、亲子鉴定以及群体遗传学分析，位点多，准确性更高，灵敏性更好。

为了实现上述发明目的，本发明所采取的技术方案：短串联重复序列的复合扩增体系，该复合扩增体系中包括28对引物，可同时扩增26个STR位点：D1S1656、D2S441、D2S1338、D3S1358、D4S2366、D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D10S1248、D12S391、D13S317、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、D22S1045、CSF1PO、FGA、Penta D、Penta E、TH01、TPOX、vWA、D11S2368、D14S608及Amelogenin，Y-indel。

所述引物以及对应的引物浓度分别为(表1)：

表1：复合扩增体系各基因座引物序列及浓度比例

所述扩增体系中的被扩增位点分别由五种颜色的荧光标记，相同荧光标记视为同一组，五组组合分别为：

FAM：TH01、D5S818、D21S11、D18S51、D6S1043；

HEX：Y-Indel、AMEL、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、Penta D；

TAMRA：D2S441、vWA、D8S1179、TPOX、Penta E；

ROX：D19S433、D22S1045、D2S1338、FGA；

PURPLE：D4S2366、D12S391、D1S1656、D10S1248、D11S2368、D14S608；

六组组荧光标记分别为FAM、HEX、TAMRA、ROX、PURP和ORG。

所述第一组的标记为FAM标记，第二组的标记为HEX标记，第三组的标记为TAMRA标记，第四组的标记为ROX标记,第五组的标记为PURP标记。该复合扩增体系检测用的内标采用橙色荧光素标记物ORG标记，为第六组荧光标记。