[发明专利]用于二代测序质量评估的文库、试剂及应用

权利要求书

1.一种用于二代测序质量评估的文库，其特征在于：所述文库为具有不同碱基特征的已知序列的单链DNA文库，并且在所述文库中连接有接头序列和索引序列；所述具有不同碱基特征的已知序列的单链DNA文库包括高AT含量单链DNA、高GC含量单链DNA、poly结构单链DNA和发夹结构单链DNA；所述文库的两端还具有通用引物结合序列；

所述高AT含量单链DNA是指AT含量大于或等于72.95%的单链DNA；

所述高GC含量单链DNA是指GC含量大于或等于75.47%的单链DNA。

2.根据权利要求1所述的文库，其特征在于：所述单链DNA文库由SEQ ID NO.7所示序列、SEQ ID NO.8所示序列、SEQ ID NO.9所示序列、SEQ ID NO.10所示序列、SEQ ID NO.11所示序列和SEQ ID NO.12所示序列组成。

3.一种克隆载体，所述克隆载体包括质粒和插入片段，其特征在于：所述插入片段包括权利要求1或2所述的文库。

4.根据权利要求3所述的克隆载体，其特征在于：所述质粒为pMD18-T或pMD19-T。

5.一种工程菌，所述工程菌包括受体菌和导入并保存于受体菌中的权利要求3或4所述的克隆载体。

6.根据权利要求5所述的工程菌，其特征在于：所述受体菌为大肠杆菌。

7.一种用于二代测序质量评估的试剂，其特征在于：所述试剂包括权利要求1或2所述的文库、权利要求3或4所述的克隆载体或者权利要求5或6所述的工程菌。

8.根据权利要求7所述的试剂，其特征在于：还包括通用引物，所述通用引物的上游引物为SEQ ID NO.13所示序列，下游引物为SEQ ID NO.14所示序列。

9.根据权利要求7或8所述的试剂，其特征在于：还包括splint oligo，所述splintoligo为SEQ ID NO.15所示序列。

10.根据权利要求1或2所述的文库、权利要求3或4所述的克隆载体、权利要求5或6所述的工程菌或者权利要求7-9任一项所述的试剂在碱基与测序质量关系评估、扩增酶碱基偏好性和准确性评估、测序酶准确性评估、碱基信号提取评估或改善、二代测序准确度检测或者建库到测序各个环节错误率检测中的应用。

11.一种提高核酸测序准确性的方法，其特征在于：包括采用一个具有不同碱基特征的已知序列的单链DNA文库进行测序，将测序结果与已知序列进行比较，统计分析在不同碱基特征中存在的测序偏差，根据所述测序偏差纠正测序软件算法，从而提高核酸测序准确性；所述具有不同碱基特征的已知序列的单链DNA文库包括高AT含量单链DNA、高GC含量单链DNA、poly结构单链DNA和发夹结构单链DNA；

所述poly结构单链DNA包括poly A结构单链DNA、poly T结构单链DNA、poly G结构单链DNA和poly C结构单链DNA中的至少一种；

所述高AT含量单链DNA是指AT含量大于或等于72.95%的单链DNA；

所述高GC含量单链DNA是指GC含量大于或等于75.47%的单链DNA。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于：所述单链DNA文库为权利要求1或2所述的文库。