[发明专利]一种适用于长链非编码RNA构建及表达的整合型慢病毒载体系统及其应用在审
| 申请号： | 201711330707.9 | 申请日： | 2017-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN109913499A | 公开（公告）日： | 2019-06-21 |
| 发明（设计）人： | 陈建儒;艾强;姜军;吴庆;卢衬红;沈浩;吴涛;朱向莹;曹跃琼 | 申请（专利权）人： | 上海吉凯基因化学技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/66;C12N5/10;C12N15/113 |
| 代理公司： | 上海光华专利事务所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 李艳;许亦琳 |
| 地址： | 200233 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 慢病毒载体 整合型 慢病毒载体系统 非编码RNA 长链 构建 生物技术领域 转染宿主细胞 病毒滴度 功能研究 基因表达 冗余序列 宿主细胞 应用 | ||
1.一种适用于长链非编码RNA构建及表达的慢病毒载体，为慢病毒穿梭质粒，所述慢病毒穿梭质粒包括原核表达区和真核表达区，所述真核表达区包括位于5'LTR与3'LTR之间的目的基因表达框，所述目的基因表达框包括沿反义链5'-3'方向依次排列的启动子-MCS-转录终止子。
2.根据权利要求1所述的慢病毒载体，其特征在于，还包括以下特征中的任一项或多项：所述转录终止子为poly(A)；所述启动子选自广谱II型启动子或组织特异性启动子。
3.根据权利要求2所述的慢病毒载体，其特征在于，还包括以下特征中的任一项或多项：所述poly(A)选自Synthetic poly(A)、SV40late poly(A)、SV40early poly(A)、hGHpoly(A)或bGH poly(A)；所述启动子选自Ubi、CMV、CAG、EF1α、EFS、GFAP或SYN。
4.根据权利要求1所述的慢病毒载体，其特征在于，所述真核表达区还包括位于5'LTR上游的上游启动子以及位于3'LTR下游的下游终止子。
5.根据权利要求1所述的慢病毒载体，其特征在于，所述原核表达区包括复制子和抗性筛选基因。
6.一种适用于长链非编码RNA构建及表达的整合型慢病毒载体系统，包括如权利要求1～5任一项所述慢病毒载体、pHelper 1.0载体和pCMV-VSV-G载体及宿主细胞。
7.如权利要求6所述的整合型慢病毒载体系统，其特征在于，所述宿主细胞为293T细胞。
8.如权利要求6～7任一项所述整合型慢病毒载体系统在整合型慢病毒载体制备领域的用途。
9.一种整合型慢病毒载体的制备方法，使用如权利要求6-7任一权利要求所述的适用于长链非编码RNA构建及表达的整合型慢病毒载体系统，包括如下步骤：
a)将如权利要求1～5任一项所述慢病毒载体、pHelper 1.0载体和pCMV-VSV-G载体共同转染宿主细胞；
b)培养宿主细胞；
c)分离获得整合型慢病毒载体。
10.如权利要求9所述的一种整合型慢病毒载体的制备方法，其特征在于，所述步骤a)中，将如权利要求1～5任一项所述慢病毒载体、pHelper 1.0载体和pCMV-VSV-G载体共同转染宿主细胞前，还将目的基因克隆入如权利要求1～5任一项所述慢病毒载体。
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