[发明专利]一种胎儿纤维连接蛋白荧光免疫层析试条及其制备方法

说明书

本发明提供一种胎儿纤维连接蛋白荧光免疫层析试条及其制备方法，所述试纸条包括底板、反应膜、样品垫、结合垫和吸收垫；所述结合体垫包被有荧光标记的鼠抗胎儿纤维连接蛋白单克隆抗体1（M×fFN1）和荧光标记的兔IgG；所述反应膜具有一条T线检测区及C线质控区，包被的抗体分别为鼠抗胎儿纤维连接蛋白单克隆抗体2（M×fFN2）与鼠抗兔IgG单克隆抗体（M×RbIgG）。该方法简便、快捷、高灵敏度、高特异性，适用于床边快速定量检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种用于早产预测的胎儿纤维连接蛋白（fFN）荧光免疫层析试条及其制备方法。

背景技术

早产是新生儿患病甚至死亡的主要原因。精确辨别早产风险高的孕妇可以让妇产科提供有针对性的治疗，例如注射类固醇类药物以促进胎儿肺部发育等。早产的预测方法有很多种，如早产高危因素识别、子宫活动监测、孕妇体液中针对炎症的各种细胞因子的检测、宫颈阴道分泌物中胎儿纤维连接蛋白（Fetal Fibronectin，fFN）检测和超声测量宫颈长度等。在各种早产预测方法中，从循证医学的证据分析确定具有预测意义并且广泛应用于临床的只有利用超声测量的宫颈长度和宫颈阴道分泌物中fFN的检测这两种方法，其中通过fFN检测评估早产风险的准确度更高。

目前检测宫颈阴道分泌物中fFN的方法主要有两种：第一种是基于酶联免疫吸附法（ELISA）的定量检测。另一种是基于胶体金试条的病床边快速定性检测。由于胶体金试条具有操作简便快捷、30分钟内获得测试结果、成本低廉等优势，目前在科研及临床上得到了广泛的使用。正常情况下，妊娠22-35周间，宫颈阴道分泌物中fFN应为阴性(浓度<50ng/ml)。fFN早产检测阴性结果(浓度<50ng/ml)的预测值很高（92%-99%），可基本排除两周内早产的可能性。但fFN测试阳性(浓度>50ng/ml)的预测值非常低，只有9%-46%。阳性检测结果的定量检测通过细分fFN不同浓度区间，可提高阳性检测结果的预测值。但ELISA仪器昂贵，对操作人员专业性要求高，患者样品需要被送到相关的实验室进行ELISA分析，以及检测耗时长（24-36小时）等缺点限制了它的推广与使用。

量子点（QDs）是由Ⅱ~Ⅵ或Ⅲ~Ⅴ族元素组成的，半径小于或接近于激光玻尔半径，能够接收激发光产生荧光的一类半导体纳米颗粒，近似球形，可分散于水或有机溶剂中形成胶体，直径约为2nm-10nm。量子点作为荧光标记物所特有的优势，如激发光谱宽，发射波长窄，荧光强度强，稳定性好，生物相容性好，荧光寿命长的特点，使其在疾病诊断等生物医学领域具有广阔的应用前景。

因此，研发一种简便、快捷、高灵敏度、高特异性的，适用于床边快速定量检测fFN的荧光免疫层析试条具有重要的临床意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种胎儿纤维连接蛋白（fFN）荧光免疫层析试条及其制备方法，该方法简便、快捷、高灵敏度、高特异性，适用于床边快速定量检测。本发明的另一个目的在于提供制备上述荧光免疫层析检测试条的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的胎儿纤维连接蛋白（fFN）荧光免疫层析试条包括底板、反应膜、样品垫、结合垫和吸收垫。其中所述结合垫包被有荧光素标记的胎儿纤维连接蛋白单克隆抗体和荧光素标记的兔IgG；所述反应膜具有一条T线检测区及C线质控区，包被的抗体分别为鼠抗ffn单克隆抗体与鼠抗兔IgG 单克隆抗体。

所述荧光素标记的标记荧光素为水溶性带有羧基的ZnS/CdSe量子点。

所述fFN荧光免疫层析试条所用的量子点具有激发光谱宽，发射波长窄，荧光强度强，稳定性好，生物相容性好，荧光寿命长的特点。

所述反应膜为硝酸纤维素膜。

所述结合垫为聚酯膜。

所述抗体为鼠抗ffn单克隆抗体和鼠抗兔IgG 单克隆抗体。