[发明专利]一种用于口蹄疫病毒的可视化快速检测的检测试剂盒及其检测方法有效
| 申请号： | 201711334284.8 | 申请日： | 2017-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN108070677B | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 王建昌;刘立兵;王金凤;石蕊寒 | 申请（专利权）人： | 河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 13120 石家庄国为知识产权事务所 | 代理人： | 高欣<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 050051 河*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 口蹄疫病毒 检测 检测试剂 快速检测 可视化 扩增 探针 引物 层析试纸条 大型仪器 反转录酶 模板设计 肉眼可见 显色反应 靶基因 试剂盒 侧流 脱离 | ||
1.一种用于口蹄疫病毒的可视化检测的检测试剂盒，其特征在于，包括以口蹄疫病毒3D基因为模板设计RPA引物、nfo探针，扩增片段大小为258bp，其中
所述RPA引物包括FMDV-nfo-F和FMDV-nfo-R，所述FMDV-nfo-F的序列为5′-TTGGTCACTCCATTACCGATGTCACTTTCCTC-3′，所述FMDV-nfo-R的序列为5′-Biotin-AACGCAGGTAAAGTGATCTGTAGCTTGGA AT-3′；所述nfo探针为FMDV-nfo-P，所述FMDV-nfo-P的序列为5′-FAM-GC ACGCCGTGGGACCATACAGGAGAAGTTGAT(THF)TCCGTGGCAGGACTCG-C3-spacer-3′。
2.根据权利要求1所述的用于口蹄疫病毒的可视化检测的检测试剂盒，其特征在于，所述FMDV-nfo-F、FMDV-nfo-R和FMDV-nfo-P的浓度均为10μmol/L，所述FMDV-nfo-F、FMDV-nfo-R的用量均为2.1μL，所述FMDV-nfo-P的用量为0.6μL。
3.根据权利要求1或2所述的用于口蹄疫病毒的可视化检测的检测试剂盒，其特征在于，还包括Trizol试剂、M-MLV反转录酶、RNA酶抑制剂、O型口蹄疫病毒RNA、nfo-RPA反应重悬缓冲液、冻干酶制剂、醋酸镁、双蒸水、侧流层析试纸条反应缓冲液。
4.根据权利要求3所述的用于口蹄疫病毒的可视化检测的检测试剂盒，其特征在于：
所述M-MLV反转录酶的浓度为200U/μL，用量为1μL；
所述RNA酶抑制剂的浓度为40U/μL，用量为1μL；
所述O型口蹄疫病毒RNA用量为1μL；
所述nfo-RPA反应重悬缓冲液为20％聚乙二醇，用量为29.5μL；
所述双蒸水的用量为10.2μL；
所述醋酸镁浓度为280mmol/L，用量为2.5μL；
所述冻干酶制剂中包括dNTP、单链结合蛋白、recA重组酶、Bsu DNA聚合酶、内切核酸酶IV，三(羟甲基)甲基甘氨酸、聚乙二醇、二硫苏糖醇和肌酸激酶。
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