[发明专利]一种多糖裂解单加氧酶编码基因及酶和制备与应用

权利要求书

1.一种多糖裂解单加氧酶基因，其核苷酸序列具有如下特征中的一种或二种以上：

1)具有序列表中SEQ ID NO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列；

2)编码SEQ ID NO.2氨基酸序列的脱氧核糖核酸(DNA)序列；

3)对序列表中SEQ ID NO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列进行一个或两个以上核苷酸取代、缺失或添加而得到的编码具有多糖裂解单加氧酶活性的核苷酸序列；

4)与SEQ ID NO.1限定的脱氧核糖核酸(DNA)序列的同源性达到80％及以上，且能编码降解纤维素的蛋白质的脱氧核糖核酸(DNA)序列。

2.一种权利要求1所述的多糖裂解单加氧酶基因编码的多糖裂解单加氧酶，其特征在于：其氨基酸序列具有如下特征中的一种或二种：

1)序列表中SEQ ID NO.2从氨基端开始的第1-631位氨基酸残基序列；

2)对序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列进行一个或两个以上氨基酸取代、缺失或添加而形成的具有多糖裂解单加氧酶活性的氨基酸序列。

3.一种权利要求2所述的多糖裂解单加氧酶的制备方法，其特征在于：将多糖裂解单加氧酶基因克隆入重组表达载体，导入宿主细胞，获得重组表达的多糖裂解单加氧酶；

上述多糖裂解单加氧酶基因，其核苷酸序列具有如下特征中的一种或二种以上：

1)具有序列表中SEQ ID NO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列；

2)编码SEQ ID NO.2氨基酸序列的脱氧核糖核酸(DNA)序列；

3)对序列表中SEQ ID NO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列进行一个或两个以上核苷酸取代、缺失或添加而得到的编码具有多糖裂解单加氧酶活性的核苷酸序列；

4)与SEQ ID NO.1限定的脱氧核糖核酸(DNA)序列的同源性达到80％及以上，且能编码降解纤维素的蛋白质的脱氧核糖核酸(DNA)序列。

4.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的重组表达多糖裂解单加氧酶的表达载体，是指大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、枯草杆菌表达载体、乳酸菌表达载体、链霉菌表达载体、噬菌体载体、丝状真菌表达载体、植物表达载体、昆虫表达载体、或哺乳动物细胞表达载体中的一种或二种以上。

5.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：所述宿主细胞，即用于重组表达多糖裂解单加氧酶的重组菌或转基因细胞系，是指大肠杆菌宿主细胞(如Escherichia coli BL21、Escherichia coli JM109、Escherichia coli DH5α等)、酵母菌宿主细胞(如Saccharomyces cerevisiae、Pichia pastoris、 Kluyveromyceslactis等)、枯草杆菌宿主细胞(如Bacillus subtilis R25、Bacillus subtilis9920等)、乳酸菌宿主细胞(如Lacticacid bacteria COCC101等)、放线菌宿主细胞(如Streptomyces spp.等)、丝状真菌宿主细胞(如Trichodermaviride、Trichodermareesei、Aspergillusniger、Aspergillusnidulans等)、昆虫细胞(如Bombyxmori、Antharaea eucalypti等)，哺乳动物细胞(如中国仓鼠卵巢细胞CHO、幼小仓鼠肾脏细胞BHK、中国仓鼠肺细胞CHL等)中的一种。

6.一种权利要求2所述的多糖裂解单加氧酶在降解含葡萄糖及β-1,4-糖苷键的多糖中的应用。

7.一种权利要求2所述的多糖裂解单加氧酶，其特征在于该酶具有较高的耐热能力，用DSC法检测其熔化温度为52℃，且在100℃煮沸10min不会完全失活。

8.一种权利要求2所述的多糖裂解单加氧酶，其特征在于该酶具有广泛的pH适应能力，其在pH 4-9均有活性。