[发明专利]一种获取日本鳗鲡高密度SNP分子标记的方法

权利要求书

1.一种获取日本鳗鲡高密度SNP分子标记的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

1)提取基因组DNA：采用酚/氯仿抽提法从日本鳗鲡肌肉或鳍条组织中提取基因组DNA；

2)DNA模板的制备：采用内切酶对基因组DNA进行酶切，向酶切片段中加入第一接头，将所得DNA片段混池，打断，通过琼脂糖凝胶电泳回收DNA片段，对所得DNA片段进行末端平化，3’端加“A”，接着加入第二接头，得DNA模板；

3)高通量测序：通过桥式PCR扩增所制备的DNA模板，成簇后进行双端测序。

2.根据权利要求1所述的一种获取日本鳗鲡高密度SNP分子标记的方法，其特征在于：所述步骤2)中内切酶为限制性内切酶EcoRI。

3. 根据权利要求1所述的一种获取日本鳗鲡高密度SNP分子标记的方法，其特征在于：所述步骤2)中酶切反应体系为50μL，其中含有2μL 10×NEB buffer，0.5μL内切酶，0.5μL基因组DNA，其余为双蒸水。

4.根据权利要求1所述的一种获取日本鳗鲡高密度SNP分子标记的方法，其特征在于：所述步骤2)中所回收的DNA片段的长度为200bp-400bp。

5.根据权利要求1所述的一种获取日本鳗鲡高密度SNP分子标记的方法，其特征在于：所述步骤3)中桥式PCR扩增所用的上游引物序列为：5’-AATGATACGGCGACCACCGA-3’，下游引物序列为：5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGA-3’。

6.根据权利要求1所述的一种获取日本鳗鲡高密度SNP分子标记的方法，其特征在于：所述步骤3)中桥式PCR扩增条件为：98℃变性10s，65℃退火30s，72℃延伸30s，进行18个循环，最后72℃延伸5min。

7. 根据权利要求1所述的一种获取日本鳗鲡高密度SNP分子标记的方法，其特征在于：所述步骤3)中测序过程在Illumina HiSeq4000测序平台进行。