[发明专利]一种MTHFR基因的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种MTHFR基因的检测方法，其特征在于，所述检测方法针对MTHFR的多个SNP位点进行检测多重PCR扩增后检测，所述SNP位点包括：C667T和A1298C。

2.根据权利要求1所述的MTHFR基因的检测方法，其特征在于，所述的多重PCR扩增体系具体如下：

10×PCR buffer 2μL；

Mg2+(25mmol/L)1μL；

dNTPs(25mmol/L)0.6μL；

Taq酶(5U/μL)0.3μL；

C667T和A1298C模板各2μL；

C667T和A1298C上下游引物(10μmol/L)各1μL；

无菌双蒸水补齐至25μL。

3.根据权利要求1所述的MTHFR基因的检测方法，其特征在于，所述SNP位点的序列如序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，其中C667T的序列如序列表SEQ ID NO：1所示，A1298C的序列如序列表SEQ ID NO：2所示。

4.根据权利要求3所述的MTHFR基因的检测方法，其特征在于，所述的PCR反应体系中包括用于扩增SEQ ID NO：1所示片段的上下游引物序列和用于扩增SEQ ID NO：2所示片段的上下游引物序列。

5.根据权利要求4所述的MTHFR基因的检测方法，其特征在于：用于扩增SEQ ID NO：1所示片段的上下游引物序列如序列表SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示，用于扩增SEQ ID NO：2所示片段的上下游引物序列如序列表SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。

6.根据权利要求1所述的MTHFR基因的检测方法，其特征在于：所述扩增方法的反应条件为：94℃预变性5.5min；然后94℃变性30s，58℃退火45s，72℃延伸50s，36个循环后，再次72℃延伸5min。

7.根据权利要求1所述的MTHFR基因的检测方法，其特征在于：人全血样品进行PCR扩增时，PCR扩增体系中缓冲液采用全血样品PCR缓冲液。

8.一种根据权利要求1～7任一所述的MTHFR基因的检测方法的应用，其特征在于，所述扩增方法用于制备MTHFR基因的多重PCR扩增试剂盒。

9.根据权利要求8所述的MTHFR基因的多重PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：C667T和A1298C位点的扩增引物、Taq酶、dNTPs和缓冲液。

10.根据权利要求8所述的MTHFR基因的多重PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述扩增试剂盒还包括全血样品PCR缓冲液，所述缓冲液含有100mmol/L Tris-HCl，50mmol/L KCl，pH9.3～9.5。