[发明专利]一种MTHFR基因的检测方法及其应用

说明书

本发明公开了一种MTHFR基因的检测方法及其应用，所述试剂盒包括MTHFR基因SNP位点的扩增引物、Taq酶、dNTPs和缓冲液，其中MTHFR基因的SNP位点选自：C667T、A1298C、MTRR和/或A66G。本发明采用多重PCR的扩增方法，同时扩增MTHFR的多个重要SNP位点，且可以根据实际需要灵活选择扩增的位点组合，可以起到一盒多用的作用，试剂盒中的引物特异性高，错配率低，引物长度和T_m值设计合理，扩增产物便于检测分离。

本案是申请号为201711266570.5的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种MTHFR基因的检测方法及其应用，属于生物领域，尤其是生物检测领域。

背景技术

亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)，主要作用是在叶酸代谢通路中将5,10-亚甲基四氢叶酸转化为具有生物学功能的5-甲基四氢叶酸。5-甲基四氢叶酸可以进一步进入甲基传递通路，通过同型半胱氨酸的重新甲基化过程间接为DNA甲基化和蛋白质甲基化提供甲基并且使血液中的同型半胱氨酸水平保持在一个较低的水平。此外叶酸的中间代谢产物在核苷酸合成过程中也有重要的作用，通过一碳单位代谢为嘌呤环的形成提供碳原子。MTHFR基因的缺陷将导致机体多个基础生化过程的紊乱，包括细胞周期调控、DNA复制、DNA以及蛋白质甲基化修饰等，并进而引发神经管缺陷、癌症、心脑血管疾病等多种病症。MTHFR基因的缺陷对孕妇人群会引起神经管缺陷、先天性心脏病、唇腭裂、妊娠期高血压疾病，自发性流产。MTHFR是常规的孕妇检查项目，由于MTHFR基因多态性具有2个SNP位点，因此MTHFR的SNP 位点就成为了最重要的检测指标，而现有的MTHFR检测一般采用常用的测序法，测序过程耗时较长且效率较低，一次只能检测一个位点，2个位点需要进行2次检测，检测成本较高，因此，针对MTHFR的SNP位点设计一种高针对性的多重PCR扩增方法和扩增检测试剂盒成为了目前市场上的一个空缺。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是获得一种MTHFR基因的检测方法及其应用。

为实现上述发明目的之一，本发明采用的MTHFR基因的多重PCR扩增试剂盒的技术方案如下：

所述试剂盒包括MTHFR基因SNP位点的扩增引物、Taq酶、dNTPs和缓冲液，其中MTHFR基因的SNP位点选自：C667T、A1298C、MTRR和/或A66G。

本发明的试剂盒针对MTHFR的核心致病位点进行快速高效的多重PCR扩增，多个位点同时扩增，使得检测时间大大降低，且根据位点设计的引物特异性高针对性强，错配率低，扩增产物易检测易分离，便于进一步的测序或检测工作的顺利进行。

优选的，试剂盒的其中一种常用的方案是MTHFR的C667T和A1298C的同时扩增，其中C667T的序列如序列表SEQ ID NO：1所示，A1298C的序列如序列表SEQ ID NO：2 所示。

优选的，用于扩增C667T和A1298C的引物序列如序列表SEQ ID NO：3～SEQ ID NO：6所示，用于扩增SEQ ID NO：1所示片段的上下游引物序列如序列表SEQ ID NO：3和 SEQ IDNO：4所示，用于扩增SEQ ID NO：2所示片段的上下游引物序列如序列表SEQ ID NO：5和SEQID NO：6所示。

在多重PCR扩增时，每组扩增模板和引物的添加量与常规PCR相同，每组之间添加量相同，这样可以使扩增时所有的引物和模板之间的相互影响降低到最小。

本发明中的扩增试剂盒一般采用处理过的DNA样品作为扩增模板，样品一般来源于人全血或组织，处理样品可以减少血液中的免疫球蛋白G、血红蛋白和乳铁蛋白对PCR反应体系的干扰。