[发明专利]一种柏子仁药材UPLC特征图谱的构建及其检测方法

权利要求书

1.一种柏子仁药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)对照品溶液的制备：分别取色氨酸对照品和儿茶素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

(b) 供试品溶液的制备：将本品粉末过二号筛，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50-70%甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用50-70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(c) 色谱条件与系统适用性试验：以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；流速为0.4ml/min；检测波长为210nm；理论板数按色氨酸峰计算应不低于5000；所述（c）中选用Waters Cortecs T3色谱柱，柱长为100nm，内径为2.1mm，粒径为1.6µm；

（d）对照特征图谱的建立：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µl，注入超高效液相色谱仪，测定，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”，建立柏子仁药材对照特征图谱，确定具有7个特征峰，其中峰3为色氨酸、峰4为儿茶素；以峰3色氨酸峰为参照峰S峰，各特征峰的相对保留时间分别为：峰1为0.732、峰2为 0.788、峰5为3.017、峰6为3.097、峰7为3.145，相对保留时间在规定值的±5%之内；

还包括步骤（e）特征峰的指认：采用UPLC-MS-MS高分辨质谱仪进行测定，其中质谱条件为：MS系统: 四极杆-静电场轨道阱高分辨串联质谱；离子化模式: ESI–和 ESI+；锥孔电压: +/-3500/3200V；蒸发器温度：350℃；毛细管温度：320℃；全扫描：扫面范围为分子量100~1200，一级质谱分辨率70000，二级质谱分辨率为17500。

2.根据权利要求1所述的一种柏子仁药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述（b）中，供试品溶液的制备为：将本品粉末过二号筛，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

3.一种柏子仁药材的质量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a) 对照品溶液的制备：分别取色氨酸对照品和儿茶素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

(b) 供试品溶液的制备：将本品粉末过二号筛，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50-70%甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用50-70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(c) 色谱条件与系统适用性试验：以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；流速为0.4ml/min；检测波长为210nm；理论板数按色氨酸峰计算应不低于5000；所述（c）中选用Waters Cortecs T3色谱柱，柱长为100nm，内径为2.1mm，粒径为1.6µm；

（d）测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得柏子仁药材的特征图谱，将柏子仁药材特征图谱与柏子仁药材对照特征图谱进行比较，鉴别柏子仁药材的有效成分以及判别柏子仁药材的真伪。

4.根据权利要求3所述的一种柏子仁药材的质量检测方法，其特征在于，所述（b）中，供试品溶液的制备为：将本品粉末过二号筛，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。