[发明专利]一种非诊断目的的大肠埃希氏菌O157:H7的快速检测方法

说明书

本发明公开了一种非诊断目的的大肠埃希氏菌O157:H7的快速检测方法。本发明的快速检测方法以Au‑Pt‑SiO₂复合纳米微球为载体通过结合抗体和酶形成信号转导探针；用免疫磁性探针的超顺磁性对样品中目标物进行富集和分离；将被检测的目的菌大肠埃希氏菌O157:H7的信号转换为葡萄糖分子的信号，用便携式血糖仪读出。本发明基于血糖仪和两种纳米复合物捕获探针和信号转导探针，构建一种新型的经济、简便、快速、灵敏的检测食品中大肠埃希氏菌O157:H7的新方法。

技术领域

本发明属于生物学检测技术领域，特别是涉及一种非诊断目的的大肠埃希氏菌O157:H7的快速检测方法。

背景技术

大肠埃希氏菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7，E.Coli O157:H7)，是一种重要的食源性致病菌，属于主要食源性致病菌的前五位之一。E.coli O157:H7主要通过污染牛肉、奶、鸡肉及其制品，蔬菜等食物进行传播。当人感染了E.Coli O157:H7后，会出现胃肠道疾病，更有严重者甚至发展为血小板减少性紫癜(TTP)^[8-10]。目前对E.Coli O157:H7检测方法主要有国标法(增菌培养法)和各种PCR法等，各有优缺点。因此，建立一种更好的E.Coli O157:H7定性定量的新型快速检测技术，具有较大现实意义。

近年来，具有高比表面积、高导电性、催化性、低毒性等诸多优点的金铂纳米微球(Au-Pt NPs)和具有高比表面积、化学性质稳定、生物相容性好等优点的二氧化硅纳米粒子(SiNPs)作为纳米材料领域的研究热点，已被应用于生物分析、化学检测、食品检测等研究领域。Au-Pt NPs被证实具有优异的生物相容性，能够与蛋白质中的氨基和半胱氨酸残基相互作用稳定而迅速地吸附蛋白质且保持其活性，可用其结合抗体等生物大分子。然而，单独的Au-Pt NPs 常因为不稳定较易发生团聚而影响蛋白标记物的活性。近期有研究发现，将SiNPs进行氨基化或者巯基化修饰，可结合Au、Ag、Pt和Pb等金属，复合形成SiNPs/Au、SiNPs/Ag，SiNPs/Pt，结合之后不仅可以有效提高各自的分散性，降低聚集作用，还能同时拥有两种纳米材料的优点。目前，将金铂硅纳米微球(APS NPs)同时标记抗体和酶制备出信号转导探针Ab₂/APS NPs/Invertase，应用于食源性致病菌及其他待测物检测的研究都还未见报道。

综上，本发明针对现有大肠埃希氏菌O157:H7检测技术的缺陷，开发出一种大肠埃希氏菌O157:H7的快速检测方法。本发明的快速检测方法以APS NPs 为载体通过结合抗体和酶形成信号转导探针(Ab₂/APS NPs/Invertase)；用免疫磁性探针(MNPs-IgG)的超顺磁性对样品中目标物进行富集和分离，将被检测的目的菌大肠埃希氏菌O157:H7的信号转换为葡萄糖分子的信号，用便携式血糖仪(Personal Glucose Meter，PGM)读出。本研究的创新点在于基于血糖仪和两种纳米复合物MNPs-IgG与Ab₂/APS NPs/Invertase分别作为捕获探针和信号转导探针，构建一种新型的经济、简便、快速、灵敏的检测食品中的大肠埃希氏菌O157:H7的新方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种非诊断目的的大肠埃希氏菌O157:H7的快速检测方法。本发明以基于血糖仪和两种纳米复合物MNPs-IgG与Ab₂/APS NPs/Invertase分别作为捕获探针和信号转导探针，实现了对食品中的大肠埃希氏菌O157:H7定性定量的快速检测，该检测方法经济、简便、快速，具有良好的灵敏度、特异性、稳定性和准确性。

为了达到上述的目的，本发明采取以下技术方案：

一种非诊断目的的大肠埃希氏菌O157:H7的快速检测方法，包括以下步骤：