[发明专利]一种目标区域多重PCR与快速文库构建的方法

权利要求书

1.一种通过多重PCR扩增DNA并构建文库的方法，包括：

(1) 获取样本DNA；

(2) 使用添加了锚定接头且经过修饰的特异性引物对的集合，对步骤(1)得到的样本DNA进行第一轮PCR，所述添加了锚定接头且经过修饰的特异性引物对从5’到3’具有如下结构:

5’修饰的锚定接头序列+针对待扩增区域的特异性序列；

(3) 不添加新的引物，将步骤(2)得到的产物在新的反应体系中进行第二轮PCR，使得全部引物被用于扩增；

(4) 使用特殊设计的文库构建引物对，以所述特异性引物对上的所述锚定接头为引物锚定区域，进行扩增的同时在包含目标基因／区段的扩增子两端加上文库接头，所述文库构建引物对包含的引物从5’到3’具有如下结构：

5’修饰的文库接头+锚定接头序列；

(5)构建测序文库，其中纯化回收步骤(4)的扩增产物，获得所述文库，其中所述文库具有适于测序分析的片段长度分布范围；

其中，

步骤(2)中正向引物的5’修饰的锚定接头序列为5’-NH2-C6-GCTCTTCCGATCTMM，M为A或C；

步骤(2)中反向引物的5’修饰的锚定接头序列为5’-NH2-C6-GCTCTTCCGATCTKK，K为G或T；且

其中

步骤(4)中正向引物为5’NH2-C6-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTMM，

反向引物为5’NH2-C6-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATNNNNNNGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTKK，

其中M为A或C；K为G或T，N为任意碱基。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述特异性引物对的集合包括20-2000个引物对。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述步骤(2)的引物对中包括的特异性序列的长度为10-40bp，且其中所述步骤(5)的文库具有200-500bp的片段长度分布范围。