[发明专利]一种相同供体来源人间充质干细胞的多批次原代分离方法

权利要求书

1.一种相同供体来源人间充质干细胞的多批次原代分离方法，其特征在于，包括下列步骤：

无菌采集供体组织并进行处理；

将处理后的供体组织剪碎，得到2-5mm³的供体组织小块；

用100%人AB血清浸泡供体组织小块5-20 min；

将供体组织小块接种到细胞培养板中，并添加适量完全培养基，进行培养；

当游离出的贴壁细胞生长至80%-90%融合时，收获原代间充质干细胞；

收获原代间充质干细胞的同时，对原代培养体系中的供体组织小块和培养上清进行回收再处理；其中供体组织小块重复进行上述的100%人AB血清浸泡5-20 min及后续的处理，继续收获间充质干细胞；原代培养上清转移到新的细胞培养瓶中再次孵育培养，继续收获间充质干细胞。

2.根据权利要求1所述的多批次原代分离方法，其特征在于：所述供体包括新生儿脐带、胎盘、羊膜中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的多批次原代分离方法，其特征在于：当供体为新生儿脐带时，处理方法如下：无菌采集新生儿脐带浸泡于缓冲液中，在无菌环境下，将脐带剪成1-5cm长的小段，用缓冲液充分洗涤，去除残留脐带血；将脐带小段纵向剖开，剔除血管。

4.根据权利要求3所述的多批次原代分离方法，其特征在于：缓冲液为含有适量抗生素的HBSS缓冲液或PBS缓冲液。

5.根据权利要求1所述的多批次原代分离方法，其特征在于：将供体组织小块接种到细胞培养板中，将铺好组织小块的细胞培养板倒扣培养4-6 h后，再将细胞培养板翻正；向细胞培养板中添加适量完全培养基，继续培养。

6.根据权利要求1所述的多批次原代分离方法，其特征在于：将供体组织小块接种到细胞培养板中，在无菌条件下风干至组织小块边缘微干涸，再将铺好组织小块的细胞培养板倒扣培养4-6 h。

7.根据权利要求1所述的多批次原代分离方法，其特征在于：将供体组织小块接种到细胞培养板中，静置20-40分钟，再添加适量完全培养基，进行培养。