[发明专利]一种基于纳孔有机共价骨架材料的内源性肽富集方法

权利要求书

1.一种基于纳孔的共价有机骨架聚合物材料的内源性肽富集方法，其特征在于，将共价有机骨架聚合物与血清接触，采用柱固相萃取模式或分散固相萃取模式分离富集内源性肽；

所述共价有机骨架聚合物材料简写为TPB-DMTP-COF，其结构式所示：

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2.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于：所述共价有机骨架聚合物TPB-DMTP-COF是由2,5-二甲氧基对苯二甲醛和1,3,5-三(4-氨苯基)苯，在乙酸催化下于120^oC聚合得到。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述共价有机骨架聚合物材料TPB-DMTP-COF的比表面积是826.5 m²g^-1，该材料具有六方密堆规则排列的孔道结构，孔径均一，为2.5nm，其表面电荷性质可通过pH来调节，当pH5.9时材料表面带正电荷，当pH5.9时材料表面带负电荷。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：将所述共价有机骨架聚合物TPB-DMTP-COF作为富集材料，血清为样品材料，采用柱固相萃取模式（SPE）或分散固相萃取模式（dSPE）富集和纯化内源性肽；

在SPE模式下，首先将TPB-DMTP-COF富集材料加载到末端带有筛板的移液枪枪头或者SPE小柱上，采用洗脱液冲洗富集材料，之后用上样液平衡富集材料，然后将溶解在上样液中的样品材料加载到富集材料上，之后采用淋洗液冲洗富集材料，最后用洗脱液洗脱富集材料上的内源性肽；

在dSPE模式下，将TPB-DMTP-COF富集材料置于离心管中，采用洗脱液冲洗富集材料，然后用上样液平衡富集材料，之后把富集材料与溶解在上样液中的样品材料混合，孵化后，离心弃上清液，所剩沉淀部分用淋洗液冲洗，震荡后，再次离心弃上清液，沉淀部分用洗脱液洗脱内源性肽，震荡后，离心取上清液浓缩即得内源性肽。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：

上样液组成为缓冲盐组成的缓冲液与有机溶剂的混合液，有机溶剂的体积比例为0-20%，缓冲盐的浓度为2-200 mM，上样液 pH在3-12范围内；

淋洗液组成为缓冲盐组成的缓冲液与有机溶剂的混合液，有机溶剂的体积比例为0-20%，缓冲盐的浓度为2-200 mM，淋洗液 pH在3-12范围内；

洗脱液组成为缓冲盐组成的缓冲液与有机溶剂的混合液，有机溶剂的体积比例为20-90%，缓冲盐的浓度为2-200 mM，洗脱液 pH在3-12范围内。

6.按照权利要求4所述的方法，其特征在于，血清样品的上样量与TPB-DMTP-COF材料量之间的体积比例为1:2-1:1000，实验操作温度为15-50摄氏度。

7.按照权利要求4所述的方法，其特征在于，采用SPE模式富集内源性肽，冲洗富集材料所用洗脱液的体积为富集材料体积的2-50倍，平衡富集材料所用的上样液体积为富集材料体积的2-50倍，上样体积为富集材料体积的2-200倍，淋洗富集材料所用的淋洗液体积为富集材料体积的2-100倍，洗脱内源性肽所用的洗脱液体积为富集材料体积的2-30倍；采用dSPE模式富集内源性肽，冲洗富集材料所用洗脱液的体积为富集材料体积的2-500倍，平衡富集材料所用的上样液体积为富集材料体积的2-500倍，上样体积为富集材料体积的2-1000倍，淋洗富集材料所用的淋洗液体积为富集材料体积的2-1000倍，洗脱内源性肽所用的洗脱液体积为富集材料体积的2-200倍。

8.按照权利要求4所述的方法，其特征在于，采用dSPE模式富集内源性肽，振荡转数为100-2500rpm，样品材料与富集材料之间的孵化时间为10-120分钟，孵化温度为15-50摄氏度。

9.按照权利要求5所述的方法，其特征在于，有机溶剂包括但不局限于乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、正己烷、环己烷、二硫化碳、四氯化碳、二氯甲烷、溴乙烷、苯、甲苯、乙酸乙酯、正丁醇、乙醚、异丙醇、四氢呋喃中的一种或二种以上，缓冲盐包括但不局限于甲酸铵、甲酸钠、乙酸铵、乙酸钠、碳酸氢铵、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、柠檬酸钠、邻苯二甲酸氢钾、三羟甲基氨基甲烷中的一种或二种以上。