[发明专利]一种基于纳孔有机共价骨架材料的内源性肽富集方法

说明书

本发明涉及一种基于纳孔有机共价骨架材料的内源性肽富集方法。本方法使用一种具有六方堆、均一孔道结构的共价有机骨架聚合物材料，以蛋白及其酶解液的混合物，以及人血清样品为模式样品，利用材料均一孔径对蛋白等大分子的排阻作用和材料与内源性肽间的疏水及静电作用，采用固相萃取(SPE)或者分散固相萃取(dSPE)分离模式，通过优化上样液、淋洗液和洗脱液的组成、酸碱性、缓冲盐等参数，实现了对复杂样品中内源性肽的高效选择性富集。该方法具有稳定性好、选择性高、吸附量大、灵活性强、操作简便可控等优点，可用于各种复杂生物样品中的内源性肽富集。

技术领域

本发明涉及材料分析化学和蛋白组学领域，尤其涉及基于纳孔有机共价骨架材料的内源性肽富集方法。

背景技术

人体内的内源性肽，在信号传导^[1]、炎症反应^[2]、内分泌^[3]等生理过程中扮演了关键角色。一些内源性多肽还是重要的疾病标志物，例如淀粉样多肽之于阿兹海默症^[4]、利钠肽之于心脏病^[5]、胰岛素原之于糖尿病^[6]等。然而由于内源性多肽在人血等生物样品中含量极低以及生物样品本身成分的复杂性，对于人体内源性肽的富集和鉴定目前仍是一个巨大的挑战。传统的内源性肽富集方法包括乙腈沉淀^[7，8]、超滤^[9]、反相固相萃取^[10，11]等。乙腈沉淀和超滤对于内源性肽的回收率较低^[8，11]，近年来，由于富集材料的不断开发，利用疏水作用富集内源性肽的反相固相萃取法得到了发展^[12]。尤其是以MCM-41为代表的有序介孔硅材料，以其均一的孔结构、超大的比表面积，在对内源性肽的富集应用中收到了良好的效果^[13]。然而结构功能单元单一、表面电荷可调性差等缺点限制了无机多孔材料在这一领域的进一步发展。共价有机骨架聚合物(COFs)，是一种新兴的多孔晶体材料。除了兼具孔径均一、比表面积超大等无机多孔材料的优点，这种有机多孔晶体材料还具有灵活可变的结构功能单元和丰富、易于修饰的表面官能团。而迄今为止，未见此类材料应用于内源性肽富集的报道。本发明所采用的共价有机骨架聚合物TPB-DMTP-COF，其制备方法于2015年首次见诸报道^[14]。由于其具有强疏水性、均一孔径、超大比表面积以及电荷可调性，申请人认为该材料是一种能从复杂样品中高效高选择性富集内源性肽的极具潜力的新型材料。本发明采用SPE及dSPE等模式，通量高，方法灵活，操作简便，并且通过优化酸、缓冲盐及上样液、淋洗液、洗脱液的组成及比例，实现了对复杂样品中内源性肽的高选择性富集。

参考文献：

1 M.W.Schwartz，S.C.Woods，D.Porte，R.J.Seeley，D.G.Baskin，Nature，2000，404，661-671.

2 P.Geppetti，R.Nassini，S.Materazzi，and S.Benemei，Bju Int.，2008，101，2-6.3 B.Yusta，D.Matthews，G.B.Flock，J.R.Ussher，B.Lavoie，G.M.Mawe，D.J.Drucker，Mol.Metab.，2017，6，503-511.

4 O.Lazarov，J.Robinson，Y.P.Tang，I.S.Hairston，Z.Korade-Mirnics，V.M.Y.Lee，L.B.Hersh，R.M.Sapolsky，K.Mirnics，S.S.Sisodia，Cell，2005，120，701-713.

5 M.Dorkhan，A.Frid，L.Groop，Diabetes Res.Clin.Pract.，2008，82，340-345.