[发明专利]一种酶活和稳定性提高的酪氨酸酶突变体及其构建方法有效
| 申请号： | 201711353989.4 | 申请日： | 2017-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN107988176B | 公开（公告）日： | 2021-04-30 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;杨套伟;张显;徐美娟 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 稳定性 提高 酪氨酸 突变体 及其 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种酪氨酸酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.编码权利要求1所述突变体的基因。
3.一种含有权利要求2所述基因的重组表达载体。
4.一种表达权利要求1所述酪氨酸酶突变体的基因工程菌。
5.根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以大肠杆菌为宿主。
6.权利要求1所述的酪氨酸酶突变体在医药、食品、环境中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用是用于酪氨酸酶参与的生物合成。
8.一种制备权利要求5所述基因工程菌的方法，其特征在于，所述方法是在SEQ IDNO.2所示氨基酸序列的基础上，将187位氨基酸由缬氨酸突变成苏氨酸，得到重组基因，将重组基因连到表达载体得到重组质粒，重组质粒转化到大肠杆菌宿主菌中即得到大肠杆菌基因工程菌。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法具体是：(1)以SEQ ID NO.4所示核苷酸序列为模板，以序列如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示的引物，进行PCR，得到核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的V187T突变体基因序列；(2)将步骤(1)得到的重组基因序列，连接到pET28a表达载体中，得到重组质粒pET28a-V187T，重组质粒化转化到大肠杆菌宿主中，获得重组大肠杆菌基因工程菌株。
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