[发明专利]IDH1/2基因突变检测体系及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测IDH1/2基因突变的方法和检测产品，属于生物技术领域。

背景技术

2008年，Parsons等对20661个蛋白质编码基因进行高通量表达分析研究，首次发现在胶质母细胞瘤中约有12％发生了异柠檬酸脱氢酶1(isocitrate dehydrogenase 1，IDH1)的基因突变，随后，更多学者进一步的研究发现IDH1/2突变作为预后良好标志普遍存在于Ⅱ级和Ⅲ级胶质瘤以及继发性胶质母细胞瘤，并在肿瘤的发生、发展以及演变过程发挥着重要作用。IDH1/2基因突变是最常见的代谢酶基因突变类型，在胶质瘤和急性髓细胞白血病的一些亚型中相当普遍。软骨肉瘤、胆管癌、副神经节瘤、大肠癌、前列腺癌、肺癌等实体瘤也有报道。IDH突变状态与肿瘤病理分型密切相关，并且IDH突变是胶质瘤发生进展的早期事件，因此，IDH突变检测不仅能在诊断上更为及时全面，而且对于进一步深入研究肿瘤发病机制和生物学特征具有重要意义。

IDH1/2基因突变检测有助于针对该突变位点及癌代谢物的靶向治疗药物的开发，使得靶向治疗更具有效性、特异性，并减少不良反应。因此IDH1/2基因突变检测方法的建立对肿瘤的预防和治疗具有重要的指导意义。

目前对肿瘤相关基因的临床检测主要是测序法和ARMS法，并不适用。使用灵敏度较低的常规方法检测只能发现小部分患者在接受特定治疗前的肿瘤变异，采用高灵敏度法(如dPCR)检测则可以发现较高比例的携带突变型患者。目前进行IDH1/2基因突变检测的方法主要有芯片技术、探针引物技术、酶切、焦磷酸测序技术和HRM分析技术等，价格贵、繁琐或准确性不高。因此，开发一种检测IDH1/2基因突变的产品，以实现更高灵敏度、更低成本、更方便快捷的IDH1/2基因突变检测是非常有必要的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种灵敏度和特异性高，样品需求量少，可以快速便捷准确地进行IDH1/2基因突变检测的IDH1/2基因突变检测体系及其试剂盒。

本发明为解决上述技术问题提出的一种技术方案是：一种IDH1/2基因突变检测体系，包括用于检测IDH1/2基因第394密码子C394T位点和第395密码子G395A位点的上下游引物A，用于检测IDH1/2基因第419密码子G419A位点的上下游引物B，用于检测IDH1/2基因第515密码子G515A位点的上下游引物C，荧光染料SYBR GreenI，以及肽核酸；

所述上游引物A的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物A的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述上游引物B的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述下游引物B的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；

所述上游引物C的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述下游引物C的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

所述肽核酸包括核苷酸序列与IDH1/2野生型基因第394密码子C394T位点和野生型第395密码子G395A位点完全互补且核苷酸序列如SEQ ID No.7所示的肽核酸A，核苷酸序列与IDH1/2野生型基因第419密码子G419A位点完全互补且核苷酸序列如SEQ ID No.8所示的肽核酸B，核苷酸序列与IDH1/2野生型基因第515密码子G515A位点完全互补且核苷酸序列如SEQ ID No.9所示的肽核酸C。

上述上下游引物进行了LNA修饰。

上述上下游引物在反应体系中的最终浓度均为0.1～0.3μM/L。

上述上下游引物A在反应体系中的最终浓度为0.19μM/L，所述上下游引物B在反应体系中的最终浓度为0.2μM/L，所述上下游引物C在反应体系中的最终浓度为0.15μM/L。

上述肽核酸在反应体系中的最终浓度均为1～1.5μM/L。

上述肽核酸A、B、C在反应体系中的最终浓度均为1.25μM/L。

本发明为解决上述技术问题提出的一种技术方案是：一种采用上述检测体系的IDH1/2基因突变检测产品。

本发明为解决上述技术问题提出的一种技术方案是：一种IDH1/2基因突变检测试剂盒，包括PCR检测液A、PCR检测液B、PCR检测液C和SYBR GreenI混合液；