[发明专利]一种利用低温等离子体辅助基因编辑的方法在审
| 申请号： | 201711370197.8 | 申请日： | 2017-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN108192926A | 公开（公告）日： | 2018-06-22 |
| 发明（设计）人： | 喻学锋;崔浩东;周文华;江敏;黄逸凡 | 申请（专利权）人： | 深圳先进技术研究院 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N9/22;C12N15/87 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 许飞 |
| 地址： | 518055 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 低温等离子体 转运 辅助基因 细胞 细胞共培养 细胞培养液 射流 损伤 转入 基因 | ||
1.一种利用低温等离子体辅助基因编辑的方法，包括如下步骤：
1)使用低温等离子体射流处理待转运细胞；
2)在细胞培养液中加入CRISPR/Cas9体系，与处理后的待转运细胞共培养。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：低温等离子体射流喷嘴与细胞培养基表面的距离为15～30mm。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：低温等离子体射流的气体流量为1～3SLM。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：低温等离子体射流的放电频率为9～11kHz。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：低温等离子体射流的放电电压为6～15kv。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：低温等离子体射流的温度不超过细胞的最适培养温度。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：CRISPR/Cas9体系包括编码Cas9/sgRNA的质粒、mRNA、Cas9蛋白及预组装的Cas9-sgRNA核酸蛋白复合体。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：低温等离子体射流的载气为惰性气体。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：待转运细胞包括正常细胞和肿瘤细胞。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：正常细胞选自人胚肺成纤维细胞MCR-5、人肾上皮细胞293T、稳定表达绿色荧光蛋白的人非小细胞肺癌细胞GFP/293T；肿瘤细胞选自人乳腺癌细胞MCF-7、肝癌细胞HepG2、人非小细胞肺癌细胞A549、稳定表达绿色荧光蛋白的人非小细胞肺癌细胞GFP/A459。
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