[发明专利]一种用于检测人KRAS基因突变的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测人KRAS基因突变的试剂盒及其检测方法，属于分子生物学领域。

背景技术

1)KRAS基因突变在结直肠癌中的临床意义

近年来，随着人民生活水平的不断提高，饮食习惯和饮食结构的改变以及人口老龄化，我国结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的发病率和死亡率均保持上升趋势。其中，结肠癌的发病率上升尤为显著。大多数患者发现时已属于中晚期。结直肠癌发病率22.1万，死亡率11万，5年生存率63.7％。

KRAS是EGFR(表皮生长因子受体)信号传导通路中的一个关键的下游调节因子，参与细胞生长的调节，在癌变发生过程中起着重要作用。KRAS基因产物参与了控制基因转录的激酶信号传导路径，从而能调节细胞的生长与分化。KRAS基因的改变使KRAS蛋白发生变化，其结果KRAS蛋白不再具有裂解GTP分子和释放GTP分子的能力。这样的改变导致这条信号传导路径始终处于“开”通的状态。这种“开”的信号导致细胞的生长和增生。因此KRAS的过度表达与扩增导致持续的细胞增殖，这是肿瘤发生的关键一步。

西妥昔单抗和帕尼单抗是作用于EGFR的单克隆抗体，可以抑制下游的信号通路传导。2008年6月,美国临床肿瘤学会(ASCO)年会上CRYSTAL、OPUS等研究了西妥昔单抗联合FOLFIRI和FOLFOX作为转移性结直肠癌的初始治疗作用，结论为：KRAS野生型患者在加用西妥昔单抗治疗后PFS得到了显著改善。若KRAS有突变，则无论单药或联合均不应使用西妥昔单抗或帕尼单抗，因为不仅无效，还增加副反应，浪费金钱。

2008年10月，KRAS基因检测被写入《美国国立癌症综合网络(NCCN)结直肠癌临床实践指南》，专家组强烈推荐所有转移性结直肠癌患者均应进行KRAS基因型检测，原发灶或继发灶组织均可，对于KRAS野生型的患者可考虑进一步检测BRAF分型。

2010年版中国《结直肠癌诊疗规范》指出：完整的病理报告内容应该包括K-ras基因状态的检测，同时晚期/转移性结直肠癌靶向药物治疗前应检测KRAS。

2)KRAS基因突变在非小细胞肺癌NSCLC的临床意义

原发性肺癌(以下简称肺癌)是我国最常见的恶性肿瘤之一。2012年WHO统计显示，肺癌是我国目前发病率和死亡率第1位的恶性肿瘤。基于肺癌的生物学特性、治疗和预后，WHO将其分为两大类：非小细胞肺癌NSCLC和小细胞肺癌SCLC。其中NSCLC占肺癌的85％以上。虽然治疗肺癌技术有了很大的提高，但5年生存率没有明显改善，而且大多数肺癌患者死于无法控制的远处转移，传统的化疗和放疗由于缺乏特异性，取得疗效的同时也往往给患者带来较大的副作用。因此，选择肺癌细胞特异的分子靶点，应用针对该靶点的药物进行治疗，在取得明显疗效的同时又避免对正常细胞的伤害的治疗模式，已经被肿瘤学术界和广大患者所认同和采用。

EGFR(epidermal growth factor receptor,表皮生长因子受体)是目前用于NSCLC分子靶向治疗的最主要靶点。EGFR受体抑制剂TKI小分子酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor)，通过阻断细胞受体的ATP结合位点，阻止下游信号传递而产生抑制肿瘤作用。

三种EGFR-TKI(吉非替尼/易瑞沙，厄罗替尼/特罗凯，和凯美钠)是目前用于NSCLC分子靶向治疗的主要药物，但在不同的病人中EGFR-TKI的疗效差异很大。大量临床实验发现，除了EGFR突变，KRAS突变能帮助NSCLC病人更好的预测吉非替尼疗效；KRAS突变的NSCLC病人用厄洛替尼联合处理后临床预后较差。

2012年《美国国立癌症综合网络(NCCN)非小细胞肺癌临床实践指南》病理评估原则中明确：KRAS突变和内源性TKI耐药有关，确定KRAS基因状态有助于选择适合TKI治疗的病人。同时指出，KRAS基因状态是NSCLC生存的预后指标，也是EGFR-TKI药物的疗效预测指标。