[发明专利]一种固相片段法合成GpTx-1及其类似物和合成方法

说明书

本发明属于多肽制备领域，具体涉及一种固相片段法合成GpTx‑1及其类似物的合成方法。通过在分子中的Pro残基处切断法，将该分子的线性肽分为三个肽片段。片段Ⅱ，Ⅲ依次向肽树脂Ⅰ上连接得到全保护的线性肽树脂Ⅵ，其中三个带保护的肽片段(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)可同时采用多肽固相合成方法获得，与逐步合成法相比该策略极大提高了合成效率与线性肽Ⅵ的纯度；具有极大的市场前景和经济价值。

技术领域

本发明属于多肽制备领域，具体涉及一种固相片段法合成GpTx-1及其类似物的合成方法。

背景技术

电压门控钠通道(VGSC)是一类可在兴奋细胞中传导动作电位，如在中枢、外周神经元、心脏和骨骼肌细胞、以及神经内分泌细胞中传导电位的跨膜蛋白。编码人类电压门控性钠通道为多亚基的跨膜糖蛋白，由1个α亚单位(220～260kDa)和1个或多个β亚单位(33～36kDa)组成，其中α亚单位由9个亚结构单位构成。α亚单位是VGSC的功能单位，β亚单位通过与α亚单位结合以各种方式对离子通道起着重要的调控作用。α亚单位可按分布位置与功能的进行分类：Nav1.1、Nav1.2、Nav1.3主要发现在中枢神经系统中；Nav1.6和Nav1.7主要位于外周与中枢；Nav1.7、Nav1.8和Nav1.9主要是在外周神经系统。Na_V1.4主要存在于骨骼肌细胞中，Nav1.5是主要在心肌中表达。钠通道亚型最重要的功能是与伤害性感受传递、神经性疼痛的过程有关。编码Na_V1.7的SCN9A基因功能增强导致先天性神经痛,而功能缺失则导致无痛症,但并不影响运动、认知和心跳。目前的科学证据表明选择性Na_V1.7阻断剂具有镇痛作用，使得Na_V1.7已成为疼痛治疗的潜在靶标，高选择性抑制剂Na_V1.7具有开发成药的前景。

GpTx-1,最初从tarantula spider的毒液中分出，后来在Paraphysa scrofa的毒液也得到了确认。该肽分子含有34个氨基酸残基，3对二硫键，C末端含为酰胺结尾的环肽。该分子对Nav1.7、Nav1.4、Nav1.5有较高的选择性，hNav1.7 PX IC50为0.010μM、hNav1.5PX IC50则大于10μM、hNav1.4 PX IC50为0.2μM。医药巨头安进公司(Amgen Inc)科学家通过改造GpTx-1，在合成一百多个类似物筛选出Analogue 71，对Nav1.7的抑制活性相对Nav1.4、Nav1.5具有1000倍的选择性，该类似物表出临床应用前景(J.Med.Chem.2015,58,2299-2314；J.Med.Chem.2016,59,2704-2717；PCT Int.Appl.(2012),WO 2012125973 A220120920；CN 103930437 A)。但目前的文献和专利采用多肽固相合成逐步法制备GpTx-1和类似物，该合成策略效率低，耗时长，由于肽链长在合成过程中可能会遇到困难序列导致粗肽纯度低。因此，寻找一种开发高效的，高纯度、高产率的GpTx-1和类似物的合成方法是本领域目前刻不容缓的事情。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术的瓶颈，从而提出一种固相片段法合成GpTx-1及其类似物和合成方法。

为解决上述技术问题，本发明公开了一种GpTx-1及类似物的固相合成方法包括以下步骤：

第一步，分别采用多肽固相合成法制备肽树脂片段(式Ⅰ、Ⅱ和式Ⅲ)；

第二步，将式Ⅱ、Ⅲ的肽树脂进行切割，得到侧链全保护的多肽片段(式Ⅱ、Ⅲ)；

第三步，将侧链全保护的多肽片段(式Ⅱ)偶联至肽树脂(式Ⅰ)上，并脱Fmoc，得到多肽树脂(式Ⅴ)；

第四步，将侧链全保护的多肽片段(式Ⅲ)偶联至肽树脂(式Ⅴ)上，并脱Fmoc，得到多肽树脂(式Ⅵ)；

第五步，式Ⅵ所示的多肽树脂上的多肽和树脂分离，得到如式Ⅶ所示的GpTx-1线性肽。