[发明专利]一种间充质干细胞无血清培养基及培养方法

说明书

本发明公开了一种间充质干细胞无血清培养基及培养方法，无血清培养基包括基础培养基和添加成分，所述的添加成分包括低氧诱导因子‑1，所述的低氧诱导因子‑1的浓度为10‑20ng/ml；还包括力生长因子，所述的力生长因子的浓度为20‑50ng/ml。利用本发明的无血清培养基，并将间充质干细胞在5％的低氧培养条件下进行。本发明的无血清培养基成分确定，质量可控，可用于组织贴壁分离间充质干细胞，可使间充质干细胞生长正常；无血清培养基配合低氧的培养条件，对间充质干细胞的生长具有协同促进作用，间充质干细胞生长情况大大改善，同时多次传代次后仍保持了间充质干细胞的“干性”及分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞等类型细胞的能力。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体地说，涉及一种间充质干细胞无血清培养基及培养方法。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC)，是一种具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞，来源于发育早期的中胚层和外胚层。间充质干细胞最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注；现已从肌肉、脂肪、牙周质、脐血、脐带等多种组织中分离得到。间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能。MSC已经在多方面被证明是自体和异体细胞移植、治疗的理想种子细胞。目前国内外已开展了多项MSC临床应用研究，涉及多种来源的MSC类型及多种疾病类型。

从原代组织分离人脐带间充质干细胞都采用含血清培养基进行分离培养，特别是用于组织贴壁法获取间充质干细胞。血清中含有大量的氨基酸、核苷、蛋白质、激素、脂类等微量成分，可以让原代细胞轻易从组织中爬出，但血清中有些成分的含量和具体作用仍没有完全确定；且血清经常被病毒污染，还含有血小板生长因子等可能抑制细胞生长的物质。

目前国内外对于间充质干细胞的扩增体系主要是基础培养基添加5-10％浓度的胎牛血清(FBS)。FBS中含有异种蛋白质，它本身有携带细菌、病毒、蛋白传染性疾病或朊病毒的风险。另外，有研究表明干细胞在培养过程中可以吞噬培养基中的蛋白，内含有牛血清蛋白(7mg-30mg/10⁸个细胞)，可以使受者体内产生抗牛蛋白抗体，引起免疫反应，从而导致患者尤其在重复输注间充质干细胞治疗后治疗失效。

现有的无血清培养基较难使干细胞从组织中爬出，难以进行细胞原代培养。因此，成分确定、质量可控且适合进行干细胞原代培养的无血清培养基是临床应用MSC培养的必然选择。

有鉴于此特提出本发明。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种间充质干细胞无血清培养基及培养方法。本发明的无血清培养基成分确定，质量可控，可用于组织贴壁分离间充质干细胞，可使间充质干细胞生长正常；无血清培养基配合低氧的培养条件，对间充质干细胞的生长具有协同促进作用，间充质干细胞生长情况大大改善，同时多次传代次后仍保持了间充质干细胞的“干性”及分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞等类型细胞的能力。

为解决上述技术问题，本发明采用技术方案的基本构思是：

本发明的第一目的是提供一种间充质干细胞无血清培养基，包括基础培养基和添加成分，所述的添加成分包括低氧诱导因子-1，所述的低氧诱导因子-1的浓度为10-20ng/ml。

低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor，HIF)，也是低氧诱导结合蛋白，是细胞或组织在缺氧情况下产生的一种核转录因子。HIF能与人红细胞生成素基因结合增强其转录。HIF-1是HIF家族成员。HIF-1由一个120000的HIF-1α亚基和一个91000～94000的HIF-1β亚基组成，其广泛存在于哺乳动物和人体内。