[发明专利]单向式羊膜脱细胞方法

权利要求书

1.一种单向式羊膜脱细胞方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)新鲜羊膜的剥离和清洗；

b)将步骤a)所得羊膜平铺固定在具有平面的支撑体上；

c)将b)步骤处理的羊膜放入脱细胞溶液中处理；

d)将c)步骤处理的羊膜洗涤后放入核酸酶溶液中处理；

e)将d)步骤处理的羊膜洗涤后得到人脱细胞羊膜；

将步骤a)所得羊膜平铺固定在具有平面的支撑体上时，将羊膜的基质层向下平整铺在支撑体表面；

步骤c)、d)、e)对羊膜处理时，所述羊膜均固定在具有平面的支撑体上；

所述支撑体保障羊膜的基质层不直接与脱细胞溶液或核酸酶溶液接触，脱细胞溶液或核酸酶溶液仅通过羊膜上皮层渗透到羊膜的基质层；

所述脱细胞溶液包括主成分及配制溶液，所述主成分选择TrypLE^TM Select Enzyme、胰蛋白酶、中性蛋白酶、非离子型去污剂、两性离子去污剂的组合；所述配制溶液为无菌的0.9％氯化钠注射液、磷酸盐缓冲液、D-Hanks溶液或HEPES溶液；

TrypLE^TM Select Enzyme浓度为0.001％-5％v/v，胰蛋白酶浓度为0.001％-5％v/v，中性蛋白酶浓度为0.001％-5％v/v，非离子型去污剂浓度为0.001％-5％v/v，两性离子去污剂浓度为0.001％-5％v/v；

所述支撑体包括一作为支撑面的平面，以及位于支撑面侧面的凹槽，所述支撑体为刚性物体，将步骤a)所得羊膜平铺固定在具有平面的支撑体上的方法为：将羊膜平铺在支撑体的平面上，用弹性圈将平铺后羊膜的边缘固定在支撑体侧面的凹槽中。

2.根据权利要求1所述的一种单向式羊膜脱细胞方法，其特征在于，将b)步骤处理的羊膜放入脱细胞溶液中处理的条件为：在4-37℃下震荡处理1min-48h。

3.根据权利要求1所述的一种单向式羊膜脱细胞方法，其特征在于，所述核酸酶溶液是全能型核酸酶溶液或广谱型核酸酶溶液，或DNA酶和RNA酶的混合溶液，

全能型核酸酶溶液或广谱型核酸酶溶液选自Super Nuclease、Benzonase Nuclease或Biolonase Nuclease；将c)步骤处理的羊膜洗涤后放入核酸酶溶液中处理的条件为：在37℃环境中下震荡处理1-48小时。

4.根据权利要求1所述的一种单向式羊膜脱细胞方法，其特征在于，步骤d)与步骤e)中的洗涤条件为：用无菌的0.9％氯化钠注射液在4-37℃环境下对处理后的羊膜进行震荡清洗。