[发明专利]一种鳢舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测的引物和探针以及试剂盒和检测方法在审
| 申请号： | 201711384063.1 | 申请日： | 2017-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN108179203A | 公开（公告）日： | 2018-06-19 |
| 发明（设计）人： | 刘礼辉;林强;李宁求;付小哲;梁红茹;赵永亮;胡蕾 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院珠江水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 广州弘邦专利商标事务所有限公司 44236 | 代理人： | 张钇斌 |
| 地址： | 510380 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 气单胞菌 探针 引物 荧光定量PCR检测 试剂盒 鳢科 检测 鱼类 病原 简化操作程序 流行病学调查 定量分析 分子检测 快速检测 早期诊断 食物中毒 监测 节约 | ||
1.一种鳢舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测的引物，其特征在于，所述引物包括：
rpoD-F：5′-AACATGCGCGAGATGATGGA-3′(SEQ ID NO:1)
rpoD-R：5′-CGCACTCGTTGTTGGTGAAG-3′(SEQ ID NO:2)。
2.一种鳢舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测的探针，其特征在于，所述探针包括：
rpoD-P：5′-(FAM)-GCTCGACACACATCTTCAGG-(Eclipse)-3′(SEQ ID NO:3)。
其中FAM为荧光报告基团，Eclipse为荧光淬灭基团。
3.一种鳢舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测的引物和探针，其特征在于，包括以下序列：
rpoD-F：5′-AACATGCGCGAGATGATGGA-3′(SEQ ID NO:1)；
rpoD-R：5′-CGCACTCGTTGTTGGTGAAG-3′(SEQ ID NO:2)；
rpoD-P：5′-(FAM)-GCTCGACACACATCTTCAGG-(Eclipse)-3′(SEQ ID NO:3)。
其中FAM为荧光报告基团，Eclipse为荧光淬灭基团。
4.一种鳢舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1至3中任一所述的引物和探针。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括荧光定量PCR反应液。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光定量PCR反应液包括dNTP、PCR链式反应扩增酶、缓冲液。
7.根据权利要求4至6中任一所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还含有阳性标准品，所述阳性标准品为含有舒伯特气单胞菌rpoD基因的质粒。
8.一种使用权利要求1至3任一所述的引物和探针或权利要求4至7中任一所述的试剂盒对鳢舒伯特气单胞菌进行荧光定量PCR检测的方法，其特征在于，所述方法包括：提取待检测鳢科鱼类的DNA，采用上述引物和探针或试剂盒对DNA进行荧光定量PCR，得到扩增曲线，判断是否含有鳢舒伯特气单胞菌。
9.根据权利要求8所述的检测的方法，其特征在于，所述判断方法包括：荧光曲线呈S型曲线且Ct值≤37.0，判定为鳢舒伯特气单胞菌阳性；若无典型S型曲线或Ct值﹥37.0，判定为鳢舒伯特气单胞菌阴性。
10.根据权利要求9所述的检测的方法，其特征在于，采用上述方法得到质粒拷贝数X与CT值之间的线性方程为：CT＝-3.326lg X+37.072。
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