[发明专利]一种鳢舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测的引物和探针以及试剂盒和检测方法

说明书

本发明涉及一种鳢舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测的引物、探针，以及包括该探针和引物的试剂盒，和使用该探针和引物进行检测的检测方法，属于分子检测领域。本发明可以对鳢科鱼类的舒伯特气单胞菌进行快速检测，可以对鳢科鱼类的舒伯特气单胞菌进行定量分析，可以简化操作程序、节约成本，对鳢舒伯特气单胞菌的流行病学调查、病原监测、以及由舒伯特气单胞菌引起的食物中毒及其早期诊断都具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及一种鳢舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测的引物、探针，以及包括该探针和引物的试剂盒，和使用该探针和引物进行检测的检测方法，属于分子检测领域。

背景技术

舒伯特气单胞菌(Aeromonas schubertii)，为革兰氏阴性杆菌，单极鞭毛，运动极为活泼,广泛存在于淡水、海水、土壤、鱼类和脊椎动物肠道中。该菌可导致伤口感染、神经性肌膜炎，是急性腹泻的重要致病菌，严重的还会引起败血症，危及生命。在美国、欧洲及中国也发现了大量由舒伯特气单胞菌引起的食源性疾病的病例。

从2012年开始舒伯特气单胞菌相继在我国养殖的鳢科鱼类中分离报道，且在鳢科鱼类中带菌率很高，对鳢科鱼类具有较高的致病力和致死性。

细菌病病原的鉴定方法多为传统的分离纯化结合生化及分子生物学鉴定，但这种方法耗时长。而且，我们前期研究发现，携带舒伯特气单胞菌的鳢或者发病早期的鳢很难分离到细菌，阻碍了该病的发现和积极治疗，因此亟需建立快速、准确、灵敏的检测方法，给该病的早期预警提供技术支撑。

因此，建立一种快速、敏感、特异的检测和鉴定方法为鳢舒伯特气单胞菌病原的监测、早期预警、及控制，以及由舒伯特气单胞菌引起的食物中毒的早期诊断都具有重要的意义。

发明内容

针对以上不足，本发明提供一种特异、敏感、快速的检测鳢舒伯特气单胞菌的荧光定量PCR的引物和探针以及试剂盒和检测方法。

本发明通过以下方案达到上述目的：

在本发明的第一方面，提供一种鳢舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测的引物和探针。

一种鳢舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测的引物，所述引物包括：

rpoD-F：5′-AACATGCGCGAGATGATGGA-3′(SEQ ID NO:1)

rpoD-R：5′-CGCACTCGTTGTTGGTGAAG-3′(SEQ ID NO:2)。

一种鳢舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测的探针，所述探针包括：

rpoD-P：5′-(FAM)-GCTCGACACACATCTTCAGG-(Eclipse)-3′(SEQ ID NO:3)。

其中FAM为荧光报告基团，Eclipse为荧光淬灭基团。

进一步地，一种鳢舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测的引物和探针，包括以下序列：

rpoD-F：5′-AACATGCGCGAGATGATGGA-3′(SEQ ID NO:1)；

rpoD-R：5′-CGCACTCGTTGTTGGTGAAG-3′(SEQ ID NO:2)；

rpoD-P：5′-(FAM)-GCTCGACACACATCTTCAGG-(Eclipse)-3′(SEQ ID NO:3)。

其中FAM为荧光报告基团，Eclipse为荧光淬灭基团。

上述针对鳢舒伯特气单胞菌的特异性引物及探针是根据鳢舒伯特气单胞菌的rpoD基因的保守区序列设计得到。

在本发明的第二方面，提供一种鳢舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测的试剂盒，所述试剂盒包括上述引物和探针。