[发明专利]用于检测与有机磷农药相关的Ⅱ型糖尿病的易感基因芯片

权利要求书

1.一种用于检测与有机磷农药相关的Ⅱ型糖尿病的易感基因芯片，其特征在于，所述用于检测与有机磷农药相关的Ⅱ型糖尿病的易感基因芯片包括以醛基玻璃为材质的固定相载体，用于检测与有机磷农药相关的导致的Ⅱ型糖尿病易感基因的特异性寡核苷酸探针；

所述特异性寡核苷酸探针的核苷酸序列SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：8，探针被固定在固相载体上。

2.如权利要求1所述的用于检测与有机磷农药相关的Ⅱ型糖尿病的易感基因芯片，其特征在于，所述用于检测与有机磷农药相关的Ⅱ型糖尿病的易感基因芯片为：

(1)芯片共分4块相同部分，每个部分是由56个样品点组成的4行×14列矩阵，分为检测区和对照区；其中，检测区为：

①芯片阳性对照，序号SEQ ID NO：9，布控于左上、右上、中下三个位置，作为阳性对照样点，共12个，也起定位作用；

②芯片平行对照，采用SEQ ID NO：1～8探针等量混合的25uM溶液点样，一个基因位点检测区由上面2个点和下面2个点共4个点组成；

(2)对照区为：序号SEQ ID NO：10，芯片阴性对照，为TE溶液，共12个阴性对照样点，布控于左下、右下、中上三个位置。

3.一种如权利要求1所述用于检测与有机磷农药相关的Ⅱ型糖尿病的易感基因芯片的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)玻璃经醛基化修饰后预处理为固相载体；

(2)探针制备方法为，探针5’端含有15个氨基修饰的多聚dT，并经氨基基团修饰，而后用TE溶液按1:1比例稀释至终浓度为25μM；

(3)PBS溶液清洗点样仪点样针，校正；用于扩增4个易感基因突变位点的引物序列为SEQ ID NO：11～18，将特异性寡核苷酸探针的核苷酸序列作为寡核苷酸探针，采用芯片点样仪将稀释好的寡核苷酸探针印点到固相载体上，避光放置过夜，湿度65-75％，干燥芯片；

(4)干燥后，于紫外交联仪中固定芯片30min，强度600MJ，取出后将芯片置于含有饱和NaCl溶液的湿盒中，42℃水化过夜；

(5)水化后芯片在室温下2×SSC-0.1％SDS溶液中洗涤2-3次，每次各5min，0.5×SSC-0.1％SDS溶液中洗涤2次，每次各5min，双蒸水中洗涤2-3次，风干，获得基因芯片，4℃保存避光保存备用。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述4个易感基因为MTHFR、CAPN10、LEP、IL1A。