[发明专利]金线莲的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及组织培养方法，具体地，涉及一种金线莲的组织培养方法。

背景技术

金线莲属多年生草本植物。在民间具有广泛药用价值，素有“药王”、“金草”、“神草”、“鸟人参”等美称。主要功效：（成份中）氨基酸和微量元素两者的含量均高于国产西洋参和野山参；其所含牛磺酸、多糖类成分具有营养、抗衰老、养肝护肝、调节人体机体免疫的作用。

金线莲的繁殖方式常用的为：主要依靠种子自然萌发；该种繁殖方式存在成活率低与繁殖效率低的缺陷，进而限制了金线莲栽培。

发明内容

本发明的目的是提供一种金线莲的组织培养方法，该金线莲的组织培养方法具有优异的成活率以及繁殖率。

为了实现上述目的，本发明提供了一种金线莲的组织培养方法，包括：

1）将金线莲的中部茎段进行灭菌消毒，接着将中部茎段切碎作为外植体，然后将外植体外植体置于基础培养基中进行初次诱导以得到愈伤组织；

2）将愈伤组织置于诱导培养基中进行二次诱导以催生不定芽；

3）将具有不定芽的愈伤组织切块以得到愈伤组织块且愈伤组织块至少具有两个不定芽，接着将愈伤组织块置于增殖培养基中进行增殖培养以得到增殖芽块；

4）将增殖芽块置于生根培养基中进行生根培养以得到组织培养苗；

5）将组织培养苗炼苗；

其中，步骤1）-4）的培养条件均至少符合以下条件：无菌且透气；基础培养基为含有TDZ（苯基噻二唑基脲）、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）和IAA（吲哚-3-乙酸）的MS培养基；诱导培养基为含有2iP（异戊烯基腺嘌呤）、蛋白胨、嗜酸乳杆菌的MS培养基；增殖培养基为含有玉米素、水解酪蛋白、活性炭的MS培养基；生根培养基含有1/2MS培养基。

在上述技术方案中，本发明采取金线莲的中部茎段作为外植体，然后依次经过初次诱导、二次诱导、增殖培养、生根培养、炼苗以得到成熟的金线莲，在各个培养工序中采用特定的培养基进而使得得到的金线莲具有优异的成活率和高产率，在此基础上能够大面积的进行培育金线莲，从而为金线莲的推广奠定了坚实的基础。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

本发明提供了一种金线莲的组织培养方法，包括：

1）将金线莲的中部茎段进行灭菌消毒，接着将中部茎段切碎作为外植体，然后将外植体外植体置于基础培养基中进行初次诱导以得到愈伤组织；

2）将愈伤组织置于诱导培养基中进行二次诱导以催生不定芽；

3）将具有不定芽的愈伤组织切块以得到愈伤组织块且愈伤组织块至少具有两个不定芽，接着将愈伤组织块置于增殖培养基中进行增殖培养以得到增殖芽块；

4）将增殖芽块置于生根培养基中进行生根培养以得到组织培养苗；

5）将组织培养苗炼苗；

其中，步骤1）-4）的培养条件均至少符合以下条件：无菌且透气；基础培养基为含有TDZ、2,4-D和IAA的MS培养基；诱导培养基为含有2iP、蛋白胨、嗜酸乳杆菌的MS培养基；增殖培养基为含有玉米素、水解酪蛋白、活性炭的MS培养基；生根培养基含有1/2MS培养基。

在本发明的基础培养基中，各组分的含量可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高金线莲的成活率和繁殖效率，优选地，在基础培养基中，TDZ的含量为0.5-0.6mg/L，2,4-D的含量为0.5-0.6mg/L，IAA的含量为0.05-0.12mg/L。

在本发明的诱导培养基中，各组分的含量可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高金线莲的成活率和繁殖效率，优选地，在诱导培养基中，2iP的含量为0.05-0.12mg/L，蛋白胨的含量为1.5-2.5mg/L，嗜酸乳杆菌的菌落含量为100-150CFU/L。

在本发明的增殖培养基中，各组分的含量可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高金线莲的成活率和繁殖效率，优选地，在增殖培养基中，玉米素的含量为0.6-0.8mg/L，水解酪蛋白的含量为0.6-1mg/L，活性炭的含量为0.5-0.6mg/L。

在本发明的各种培养基中，为了更好地为各个组织提供优异的养分以及适宜的培养条件，优选地，基础培养基、诱导培养基、增殖培养基以及生根培养基均含有6.5-7.0g/L的琼脂和25-30g/L的蔗糖，且pH值为6.0-7.0。