[发明专利]一种生产几丁寡糖的方法在审
| 申请号： | 201711394193.3 | 申请日： | 2017-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN108130347A | 公开（公告）日： | 2018-06-08 |
| 发明（设计）人： | 王晓辉;李世泰;张庆芳 | 申请（专利权）人： | 大连大学 |
| 主分类号： | C12P19/12 | 分类号： | C12P19/12;C12P19/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 大连八方知识产权代理有限公司 21226 | 代理人： | 朱秀芬 |
| 地址： | 116622 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 几丁寡糖 胶体几丁质 菌株 微生物技术领域 产业化应用 产物杂质 几丁质酶 酶解反应 几丁质 产酶 二糖 分泌 制备 生产 转化 研究 | ||
1.一种生产几丁寡糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将产低温几丁质酶的菌株(分类命名为假交替单胞菌Pseudoalteromonas sp.DL-6，保藏编号为CGMCC No.8580)接种于种子培养基中摇床培养，得到种子液；
(2)将步骤(1)得到的种子液接入产酶培养基中培养，将培养物离心，取上清液，得到含有低温的几丁质酶的粗酶液；
(3)将胶体几丁质、粗酶液用50mM Tris–HCl缓冲液调节pH值至7.0～10.0，调节几丁质酶终浓度为8～12U/L，酶与胶体几丁质比为3000～6000U/g，15～30℃反应后离心，冷冻干燥，得到几丁寡糖。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的种子培养基的成分为牛肉膏1～3g/L，胰蛋白胨5～8g/L，原地海水配制，pH自然。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的培养温度为15～30℃，转速为160～220rpm，时间为30～48h。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述产酶培养基的组分为胶体几丁质5～20g/L，胰蛋白胨5～10g/L，原地海水配制，pH自然。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述接入的比例为种子液的体积百分比5％～10％。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的pH为7.0～10.0，温度为15～30℃，转速为160～300rpm，通气量为1～6L/min/L，时间为1～5天。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的离心的转速为8000～10000rpm，温度为4℃，时间为15～20min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的胶体几丁质的制备方法为：
步骤a)取10g几丁质粉末置于研钵，于通风橱内缓慢加入80～100mL，85％的浓磷酸，同时不断的用玻璃棒充分搅拌；
步骤b)将研钵用保鲜膜封口，4℃下过夜；用大量的ddH2O冲洗至pH 5.0左右离心；
步骤c)用缓冲液(如0.1M磷酸缓冲液，pH 7.0)定容为1L。配制成1％胶体几丁质溶液，避光保存于冰箱备用。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述反应的时间为12～24h。
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